| 查看: 2494 | 回复: 7 | ||
[求助]
用DNase除RNA里的DNA，可是RNA也会降解，求解答。 已有3人参与
|
|
我一般用OMEGA的试剂盒提取棉花子叶的RNA，严格按照它的流程操作，可是依旧有DNA污染。然后用全式金的DNase,buffer,没有rna酶的dd水去除DNA，在除之前测了rna浓度是567ng,可是除完以后就剩下68ng。我是想要做PT-PCR的，现在停在了这一步。只要除DNA，RNA的损耗也很大，要想逆转录成功的话，rna的浓度不得到100以上吗？跪求高手给个解答啊，我把流程贴一下：一、DNase处理残留RNA 处理体系的建立： 45微升：总RNA20微升，buffer4.5微升，DNase4.0微升，没有RNA酶的dd水补齐。然后37°抽提1个小时， 二、处理后DNA的纯化 1. 首先加入200ul的DEPC 处理水（增加抽提的体积，以减少抽提过程中RNA的损失量）。 2. 加等体积的氯仿，充分颠倒混匀，12500g, 离心5min，吸取上清至另一新的1.5ml的离心管中。 3. 加2倍体积的异丙醇，冰上20min(也可-20℃，20min)。 4. 13000g, 离心5min，小心弃上清，加400ul的无水乙醇，颠倒混匀。 5. 13000g, 离心5min，小心弃上清，再瞬时离心，吸去残留的无水乙醇，RNA沉淀至通风橱中干燥。 6. 加适当体积的DEPC 处理水溶解沉淀（按照上面体积，则可加13ul的DEPC 处理水）。 注：步骤1是优化后自行加入的，因为这样扩大了抽提的总体积，在离心后吸取上清液时较容易，并且减少了RNA的损失量。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有256人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA非常容易降解吗？
已经有4人回复
- 反转录RNA时出现基因组DNA的原因有哪些？
已经有10人回复
- 基因组DNA有RNA污染
已经有6人回复
- 除了DNA/RNA以外，目前已知的具有遗传功能的物质还有哪些？
已经有3人回复
- DNA提取时有RNA污染
已经有23人回复
- 提取总DNA出现RNA污染，会不会影响后续PCR及测序问题
已经有8人回复
- 提取的RNA样本，经过DNA酶处理，但总是处理不干净
已经有12人回复
- 细菌蛋白溶液如何快速除去DNA和RNA
已经有6人回复
- DNA提取过程中的RNA消化
已经有4人回复
- 关于DNase1 去除提取的RNA中基因组DNA的问题
已经有12人回复
- trizol 提RNA，DNA酶的问题
已经有7人回复
- 用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？
已经有16人回复
- RNA样品中的未除尽基因组DNA
已经有10人回复
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 高压蒸汽灭菌可以使DNA和RNA降解吗？
已经有9人回复
- 怎么消化掉RNA中的DNA和蛋白质
已经有5人回复
- 提取RNA时，为何会有DNA条带，并且有且只有一条带？
已经有9人回复
- 【求助/交流】RNA降解问题求赐教
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于RNA提取后DNaseⅠ的处理
已经有11人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】DNase 处理 RNA 的具体步骤（不用试剂盒）
已经有12人回复
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-11-15 13:16:37
3楼2014-11-15 14:48:07
zshw_001
金虫 (小有名气)
- 应助: 77 (初中生)
- 金币: 506.4
- 帖子: 171
- 在线: 27.6小时
- 虫号: 1151714
- 注册: 2010-11-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2014-11-15 15:08:17
5楼2014-11-15 19:07:45
6楼2014-11-15 19:09:12
7楼2014-11-15 19:09:37
8楼2014-11-15 21:52:30
