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用DNase除RNA里的DNA，可是RNA也会降解，求解答。 已有3人参与
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我一般用OMEGA的试剂盒提取棉花子叶的RNA，严格按照它的流程操作，可是依旧有DNA污染。然后用全式金的DNase,buffer,没有rna酶的dd水去除DNA，在除之前测了rna浓度是567ng,可是除完以后就剩下68ng。我是想要做PT-PCR的，现在停在了这一步。只要除DNA，RNA的损耗也很大，要想逆转录成功的话，rna的浓度不得到100以上吗？跪求高手给个解答啊，我把流程贴一下：一、DNase处理残留RNA 处理体系的建立： 45微升：总RNA20微升，buffer4.5微升，DNase4.0微升，没有RNA酶的dd水补齐。然后37°抽提1个小时， 二、处理后DNA的纯化 1. 首先加入200ul的DEPC 处理水（增加抽提的体积，以减少抽提过程中RNA的损失量）。 2. 加等体积的氯仿，充分颠倒混匀，12500g, 离心5min，吸取上清至另一新的1.5ml的离心管中。 3. 加2倍体积的异丙醇，冰上20min(也可-20℃，20min)。 4. 13000g, 离心5min，小心弃上清，加400ul的无水乙醇，颠倒混匀。 5. 13000g, 离心5min，小心弃上清，再瞬时离心，吸去残留的无水乙醇，RNA沉淀至通风橱中干燥。 6. 加适当体积的DEPC 处理水溶解沉淀（按照上面体积，则可加13ul的DEPC 处理水）。 注：步骤1是优化后自行加入的，因为这样扩大了抽提的总体积，在离心后吸取上清液时较容易，并且减少了RNA的损失量。 |
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5楼2014-11-15 19:07:45
Neo2000
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