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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细菌蛋白溶液如何快速除去DNA和RNA
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fushxmy

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌蛋白溶液如何快速除去DNA和RNA

大肠杆菌菌体用0.1的石英砂破壁后，如何用最简单的办法把溶液中的DNA和RNA（不求去除完全），但是不影响蛋白。（最好不用有机溶剂，以便后续操作）
      另外，如果溶液加热至65℃，DNA变性能用离心去除吗？如果离心大概转速是多少？时间多少？
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秦皇汉武
1楼2013-07-14 23:32:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
简单的办法是加DNase和RNase，这样可以完全消除核酸。如果你只是想把核酸打碎，可以试试超声。加热什么的不能去掉核酸，核酸是很耐热的，你只要看看PCR时的条件就知道了。热变性核酸也是可逆的。
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2楼2013-07-14 23:47:33
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526579804

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA是很容易变性的，DNA只要在TM值溶解度价格低，可以用于变性，不过要计算TM值，楼主可以试试。。。
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3楼2013-07-15 00:27:35
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-14 23:47:33
简单的办法是加DNase和RNase，这样可以完全消除核酸。如果你只是想把核酸打碎，可以试试超声。加热什么的不能去掉核酸，核酸是很耐热的，你只要看看PCR时的条件就知道了。热变性核酸也是可逆的。

我想把DNA从破菌液中去除，因为DNA的存在影响我后续的蛋白吸附，超声我试过了，破菌液开始很粘，超声后离心变清了，但是蛋白吸附后（疏水吸附），上maldi-tof后，谱峰并没有变好，我认为可能很多DNA吸附到我合成的材料的表面，而使蛋白无法附着到材料上。
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秦皇汉武
4楼2013-07-15 10:55:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fushxmy at 2013-07-15 10:55:07
我想把DNA从破菌液中去除，因为DNA的存在影响我后续的蛋白吸附，超声我试过了，破菌液开始很粘，超声后离心变清了，但是蛋白吸附后（疏水吸附），上maldi-tof后，谱峰并没有变好，我认为可能很多DNA吸附到我合成的 ...

那你试试用DNase消化一下。
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5楼2013-07-15 10:59:19
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-15 10:59:19
那你试试用DNase消化一下。...

消化一下，核苷酸不是还存在吗？
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秦皇汉武
6楼2013-07-15 11:43:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by fushxmy at 2013-07-15 11:43:30
消化一下，核苷酸不是还存在吗？...

一般吸附不会把核苷酸吸附上去吧。
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7楼2013-07-15 11:47:43
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