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fushxmy

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌蛋白溶液如何快速除去DNA和RNA

大肠杆菌菌体用0.1的石英砂破壁后,如何用最简单的办法把溶液中的DNA和RNA(不求去除完全),但是不影响蛋白。(最好不用有机溶剂,以便后续操作)
      另外,如果溶液加热至65℃,DNA变性能用离心去除吗?如果离心大概转速是多少?时间多少?
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秦皇汉武
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
简单的办法是加DNase和RNase,这样可以完全消除核酸。如果你只是想把核酸打碎,可以试试超声。加热什么的不能去掉核酸,核酸是很耐热的,你只要看看PCR时的条件就知道了。热变性核酸也是可逆的。
2楼2013-07-14 23:47:33
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526579804

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA是很容易变性的,DNA只要在TM值溶解度价格低,可以用于变性,不过要计算TM值,楼主可以试试。。。
3楼2013-07-15 00:27:35
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fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-14 23:47:33
简单的办法是加DNase和RNase,这样可以完全消除核酸。如果你只是想把核酸打碎,可以试试超声。加热什么的不能去掉核酸,核酸是很耐热的,你只要看看PCR时的条件就知道了。热变性核酸也是可逆的。

我想把DNA从破菌液中去除,因为DNA的存在影响我后续的蛋白吸附,超声我试过了,破菌液开始很粘,超声后离心变清了,但是蛋白吸附后(疏水吸附),上maldi-tof后,谱峰并没有变好,我认为可能很多DNA吸附到我合成的材料的表面,而使蛋白无法附着到材料上。
秦皇汉武
4楼2013-07-15 10:55:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fushxmy at 2013-07-15 10:55:07
我想把DNA从破菌液中去除,因为DNA的存在影响我后续的蛋白吸附,超声我试过了,破菌液开始很粘,超声后离心变清了,但是蛋白吸附后(疏水吸附),上maldi-tof后,谱峰并没有变好,我认为可能很多DNA吸附到我合成的 ...

那你试试用DNase消化一下。
5楼2013-07-15 10:59:19
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fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-15 10:59:19
那你试试用DNase消化一下。...

消化一下,核苷酸不是还存在吗?
秦皇汉武
6楼2013-07-15 11:43:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by fushxmy at 2013-07-15 11:43:30
消化一下,核苷酸不是还存在吗?...

一般吸附不会把核苷酸吸附上去吧。
7楼2013-07-15 11:47:43
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