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静待一片天yu

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白做WB没条带 已有1人参与

最近做了一个蛋白(可能含有糖基化)的WB检测,WB全阴,但Elisa结果还可以,我知道Elisa阳性不一定代表WB也阳性,也试过非变性电泳,但是不理想(分子量不对)(本实验室非变性电泳技术有限,还请各位大侠出出主意),请各位高手给些建议。PS:用这个蛋白生产单抗的,用该蛋白做检测原,检抗体的。
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绯红誓言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到过类似问题,解释是:“正巧抗体所识别抗原表位结构是空间结构,在还原Buffer作用下发生改变(因为都知道还原buffer等一系列处理,会使蛋白空间结构变成直链),导致变性后无法识别。”
此外,你说你们实验室有做非还原电泳分子量不对,Elisa检测正常,也映证了蛋白结构在非变性时与变性后结构不一样。
2楼2015-06-29 22:49:59
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