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lxx071217

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白提取中的沉淀是什么？

目前在提取蛋白时出现了些问题，希望能得到大家的帮助。
我用的是ripa裂解液，加了蛋白酶抑制剂，将贴壁细胞刮下来，冰上继续裂解，期间vortex几次，最后12,000gx10min ;此时分别取上清和沉淀加入loading buffer煮沸5min，上样做WB。发现上清和沉淀中均有目的条带。现想咨询：离心后的沉淀是什么成分？（细胞核？碎片？还是不溶性蛋白）；如果是不溶性的蛋白加了loading buffer煮沸就可以电泳做WB了吗？如果我想检测全细胞的蛋白，不分可溶性和不溶性，应该怎么做呢？
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1楼 2012-02-26 19:45:01
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励 2012-02-27 00:00:53
ripa裂解液分强中弱，强的可以裂解细胞核，弱的对核蛋白的提取效果不是很好，所以离心下来的可能是未完全裂解的核蛋白吧。
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2楼2012-02-26 19:57:32
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上看法，可以使用全蛋白提取试剂盒  BSP003
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3楼2012-02-26 23:53:32
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-28 08:13:04
沉淀可能是细胞碎片和不溶的蛋白。
加loading buffer煮的时候蛋白彻底变性，而且loading buffer里有SDS，很多不溶的蛋白这时也溶解了。沉淀煮了之后离心取上清是可以做WB的。
如果只是检测全细胞的蛋白，直接加入裂解液，刮下细胞，加入loading buffer煮了之后离心，取上清点样就可以了。
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
4楼2012-02-27 20:08:51
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