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新虫 (初入文坛)

[求助] 功能基因克隆出现问题

本虫最近在做一种白腐真菌(木腐菌)的漆酶基因克隆实验,总RNA的提取、反转录cDNA都应该没有问题,用LAC保守区的通用引物PCR也得到了想要的序列,NCBI上比对没有问题;但是,接下来我根据近缘种的漆酶基因cDNA完整序列设计了引物,通过PCR、切胶回收、连接和转化,选了3个阳性克隆子PCR后进行测序,NCBI上比对,结果显示3个序列都跟漆酶相关,但是3个序列不一样,有很多位点差异,小弟不明白同一个基因为什么3个序列会这样的不同,另外,3个序列分别与保守区序列比对,也没有对上(保守区序列没有在全序列中),小弟对这些结果感到很迷茫,不知道是什么原因,请各位高手大侠给予指教!!! 本人不胜感激
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