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芳芳208

铜虫 (小有名气)

[求助] 功能基因克隆测序结果片段长度不一致!急求高手指导!

以350bp长度的功能基因为研究对象,进行TA克隆建立基因文库,菌液拿出去测定之后返回的目的基因片段长度不一致,从343-365bp不等,不知为何?是否可以直接用来建树还是需重测?请高手指导!
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哼哼哈嘿,快使用双截棍!
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果目标序列已知,测出来不一样,那得重测
小木虫之有关部门负责人
2楼2012-11-07 14:53:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你和原序列做了比较吗?有时候是测序灵敏度问题,引物附近的分辨率不高。
3楼2012-11-07 15:06:11
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芳芳208

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-07 15:06:11
你和原序列做了比较吗?有时候是测序灵敏度问题,引物附近的分辨率不高。

尚未查到有关原序列的相关资料,只是说了序列的长度,我坐了两种功能基因都出现了这种情况,难道都是引物的问题?
哼哼哈嘿,快使用双截棍!
4楼2012-11-08 08:36:37
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)

目的片段的多态性很高吗?如果是微生物我觉得应该正常吧
5楼2012-11-08 09:00:15
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芳芳208

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yuer9809 at 2012-11-08 09:00:15
目的片段的多态性很高吗?如果是微生物我觉得应该正常吧

不高,克隆后用HaeIII酶切看了下多态性,很多都只有一个条带,其它的也就两三个条带,多态性不太好。我也不知道怎么回事,其他人做别的功能基因测序回来片段长度都是一样的,我的就不是。
哼哼哈嘿,快使用双截棍!
6楼2012-11-08 13:34:12
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