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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 功能基因克隆测序结果片段长度不一致！急求高手指导！
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芳芳208

铜虫 (小有名气)

[求助] 功能基因克隆测序结果片段长度不一致！急求高手指导！

以350bp长度的功能基因为研究对象，进行TA克隆建立基因文库，菌液拿出去测定之后返回的目的基因片段长度不一致，从343-365bp不等，不知为何？是否可以直接用来建树还是需重测？请高手指导！
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哼哼哈嘿，快使用双截棍！
1楼 2012-11-07 09:52:16
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果目标序列已知，测出来不一样，那得重测
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小木虫之有关部门负责人
2楼2012-11-07 14:53:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你和原序列做了比较吗？有时候是测序灵敏度问题，引物附近的分辨率不高。
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3楼2012-11-07 15:06:11
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芳芳208

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-07 15:06:11
你和原序列做了比较吗？有时候是测序灵敏度问题，引物附近的分辨率不高。

尚未查到有关原序列的相关资料，只是说了序列的长度，我坐了两种功能基因都出现了这种情况，难道都是引物的问题？
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哼哼哈嘿，快使用双截棍！
4楼2012-11-08 08:36:37
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)
目的片段的多态性很高吗？如果是微生物我觉得应该正常吧
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5楼2012-11-08 09:00:15
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芳芳208

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuer9809 at 2012-11-08 09:00:15
目的片段的多态性很高吗？如果是微生物我觉得应该正常吧

不高，克隆后用HaeIII酶切看了下多态性，很多都只有一个条带，其它的也就两三个条带，多态性不太好。我也不知道怎么回事，其他人做别的功能基因测序回来片段长度都是一样的，我的就不是。
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哼哼哈嘿，快使用双截棍！
6楼2012-11-08 13:34:12
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