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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩不出目的条带
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hua546

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩不出目的条带 已有2人参与

各位虫友好，本人刚刚接触生物领域，需要扩增的目的基因长度为3696bp，设计了两次引物，做了三次梯度PCR，都没能见到目的条带，反而出现了2000多bp的条带，我不知道原因到底在哪里,向各位请教一下。引物特异性？基因过长？（顺便问一下我这个基因有点长，是否会影响之后的表达转化实验）。先谢谢了，实验刚刚起步就因为这个歌耽误了太多时间，实在着急。

PCR扩不出目的条带
捕获.PNG


PCR扩不出目的条带-1
捕获2.PNG
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1楼 2014-10-13 22:42:52
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-14 00:43:50
片段有些偏大了，你可以尝试做重叠延伸PCR。。。这样应该是可以坐出来的。不麻烦，很简单。。。你试试  好运！~
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加油，天道酬勤
3楼2014-10-13 23:45:10
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反应链

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-14 00:43:44
1图，非特异扩增。建议尝试2XGCBuffer。

2图，不好说，可切胶做TA克隆，送测序。
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2楼2014-10-13 23:22:16
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)
可以试着延长一下延伸的时间。而且你其中有两个孔道也有条带出现，不过很弱而已，可以试着回收后作为模板来再扩增一次。
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4楼2014-10-14 07:14:21
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hua546

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by learningying at 2014-10-13 23:45:10
片段有些偏大了，你可以尝试做重叠延伸PCR。。。这样应该是可以坐出来的。不麻烦，很简单。。。你试试  好运！~

嗯嗯，正在了解重叠延伸PCR，多谢啦
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5楼2014-10-14 09:36:57
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