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hua546

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩不出目的条带 已有2人参与

各位虫友好,本人刚刚接触生物领域,需要扩增的目的基因长度为3696bp,设计了两次引物,做了三次梯度PCR,都没能见到目的条带,反而出现了2000多bp的条带,我不知道原因到底在哪里,向各位请教一下。引物特异性?基因过长?(顺便问一下我这个基因有点长,是否会影响之后的表达转化实验)。先谢谢了,实验刚刚起步就因为这个歌耽误了太多时间,实在着急。

PCR扩不出目的条带
捕获.PNG


PCR扩不出目的条带-1
捕获2.PNG
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新虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-10-14 00:43:44
1图,非特异扩增。建议尝试2XGCBuffer。

2图,不好说,可切胶做TA克隆,送测序。
2楼2014-10-13 23:22:16
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learningying

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-10-14 00:43:50
片段有些偏大了,你可以尝试做重叠延伸PCR。。。这样应该是可以坐出来的。不麻烦,很简单。。。你试试  好运!~
加油,天道酬勤
3楼2014-10-13 23:45:10
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

可以试着延长一下延伸的时间。而且你其中有两个孔道也有条带出现,不过很弱而已,可以试着回收后作为模板来再扩增一次。
4楼2014-10-14 07:14:21
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hua546

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by learningying at 2014-10-13 23:45:10
片段有些偏大了,你可以尝试做重叠延伸PCR。。。这样应该是可以坐出来的。不麻烦,很简单。。。你试试  好运!~

嗯嗯,正在了解重叠延伸PCR,多谢啦
5楼2014-10-14 09:36:57
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