应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr遇到问题，P出的条带总是比目的条带高
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 2534  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] pcr遇到问题，P出的条带总是比目的条带高 已有3人参与

我的目的条带是3900bp，跑胶显示总是在5000bp处，且条带比较暗。我用的是50微升体系{引物各2ul，水是35ul，buffer5微升。dntp 4ul，模板1.5ul，酶0.5ul}
退火温度我试了55度，57度，59度。55度和57度条带较亮但均有引物二聚体。59度没有引物二聚体但是条带较暗。。。三个温度条带均在5000bp处。
请问各位高手，这个是我的目的条带吗？我该怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-03 11:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:15:29
如果3个温度都扩增一致，只是亮度不一致，应该引物扩增不是非特异。
请核实，你设计的引物是否最开始时忘了吧内含子长度计算在内？
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-03 11:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:15:36
如果你确定目标片段就是3900，那么就把扩增产物两端测序（不能测通，可以每端测几百bp）再和你的目标片段比较或者到NCBI比对看到底是不是你需要的
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-03 11:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:15:42
应该是目的条带，产物有可能带了一部分内含子序列。5kb的长片段条带亮度暗一点很正常，这跟Taq酶种类、活性有关。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-03 17:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-03 11:27:24
如果3个温度都扩增一致，只是亮度不一致，应该引物扩增不是非特异。
请核实，你设计的引物是否最开始时忘了吧内含子长度计算在内？

初学，不是很懂，请问一下如何确定自己是否把内含子计算在内？多谢
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-04 10:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by koujie1986 at 2014-09-03 17:26:48
应该是目的条带，产物有可能带了一部分内含子序列。5kb的长片段条带亮度暗一点很正常，这跟Taq酶种类、活性有关。

如何确定我是否带了内含子序列呢？我用普通的酶和takara的酶P出来的都是一样的
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-04 10:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-04 19:33:39
你用什么模板？5 kb可能是质粒模板。
如果用基因组DNA扩增，可能是连内含子一起扩增出来
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-04 11:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 张冰宝 at 2014-09-04 10:10:12
初学，不是很懂，请问一下如何确定自己是否把内含子计算在内？多谢...

那你开始设计的引物的时候是如何设计的？参考序列是什么？
可以用设计引物的参考序列到NCBI网站上比对，然后就可以知道了
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-04 15:10:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-09-04 11:17:22
你用什么模板？5 kb可能是质粒模板。
如果用基因组DNA扩增，可能是连内含子一起扩增出来

就是基因组 DNA.
回复此楼
9楼2014-09-04 15:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-04 15:10:59
那你开始设计的引物的时候是如何设计的？参考序列是什么？
可以用设计引物的参考序列到NCBI网站上比对，然后就可以知道了...

我在genebank上查到我要的基因序列，然后用prime prime 5设计的引物。
赞一下 回复此楼
10楼2014-09-04 15:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:29 by 啵啵啵0119
[考研] 282求调剂 +3 aaa车辆 2026-04-01 3/150 2026-04-05 17:03 by yulian1987
[考研] 081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校 +16 披星河 2026-04-04 16/800 2026-04-05 11:27 by 猪会飞
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 生物工程求调剂 +6 喜欢还是不甘心 2026-04-05 6/300 2026-04-05 10:28 by 唐沐儿
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分，本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校 +16 披星河 2026-04-03 16/800 2026-04-05 09:00 by dick_runner
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 318求调剂 +3 笃行致远. 2026-03-31 4/200 2026-04-02 15:56 by Jaylen.
[考研] 085600，321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭