24小时热门版块排行榜    

查看: 2775  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] pcr遇到问题,P出的条带总是比目的条带高 已有3人参与

我的目的条带是3900bp,跑胶显示总是在5000bp处,且条带比较暗。我用的是50微升体系{引物各2ul,水是35ul,buffer5微升。dntp 4ul,模板1.5ul,酶0.5ul}
退火温度我试了55度,57度,59度。55度和57度条带较亮但均有引物二聚体。59度没有引物二聚体但是条带较暗。。。三个温度条带均在5000bp处。
请问各位高手,这个是我的目的条带吗?我该怎么解决呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:15:36
如果你确定目标片段就是3900,那么就把扩增产物两端测序(不能测通,可以每端测几百bp)再和你的目标片段比较或者到NCBI比对看到底是不是你需要的
3楼2014-09-03 11:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:15:29
如果3个温度都扩增一致,只是亮度不一致,应该引物扩增不是非特异。
请核实,你设计的引物是否最开始时忘了吧内含子长度计算在内?
2楼2014-09-03 11:27:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-03 18:15:42
应该是目的条带,产物有可能带了一部分内含子序列。5kb的长片段条带亮度暗一点很正常,这跟Taq酶种类、活性有关。
4楼2014-09-03 17:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-09-03 11:27:24
如果3个温度都扩增一致,只是亮度不一致,应该引物扩增不是非特异。
请核实,你设计的引物是否最开始时忘了吧内含子长度计算在内?

初学,不是很懂,请问一下如何确定自己是否把内含子计算在内?多谢
5楼2014-09-04 10:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Qj98d49dHFb9 2026-08-25 5/250 2026-08-26 04:57 by cNXvBfCpiZOM
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +18 angus9576 2026-08-25 22/1100 2026-08-26 00:41 by merchancy
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
请填处理意见