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maolilv

银虫 (职业作家)

[求助] 革兰阳性菌可以直接做菌落或菌液PCR吗 已有3人参与

我将构建好的质粒电转入金葡RN4220中,想要快速鉴定转化的菌中是否有构建的质粒,能直接做菌落或菌液PCR吗?模板是否要处理一下?怎么处理?另外革兰阳性菌提质粒,用试剂盒提的效果好,还是用自配的试剂手提的效果好?谢谢!
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流氓一个

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 19:03:55
革兰氏阳性菌直接菌落PCR的话,应该不易破壁;个人觉得还是提质粒比较好,提质粒试剂盒快速准确,建议试剂盒。
我有我人生
2楼2014-10-11 15:03:43
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 19:04:04
革兰氏阳性菌直接做菌落PCR的话效果不行,要破除细胞壁之后再做。
学习再学习,努力再努力。
3楼2014-10-11 15:50:35
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amay0001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-28 12:04:40
maolilv: 金币+20, 有帮助 2015-03-24 14:21:21
maolilv: 金币+10, 有帮助 2015-03-24 14:21:55
革兰阳性菌转化克隆绝对可以直接做PCR鉴定,PCR变性温度在90度以上,也可以省去破壁的步骤。最好设计针对质粒或插入片段各一对引物。质粒提取试剂盒技术很成熟,就不要用自己配的了。
4楼2014-10-28 10:44:32
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wxxjiang

铜虫 (初入文坛)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-09 10:35:40
可以的。我以前在大肠杆菌中构建DH5α,用你的检测质粒的引物直接做快速菌落PCR。如果你还需要后继工作,最好做好菌落增殖。免得做完后一旦是你需要的转化菌,但是由于菌没有了而后悔。
5楼2015-02-08 15:33:39
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wxxjiang

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-02-09 10:35:45
maolilv: 金币+10, 有帮助 2015-03-24 14:22:04
抱歉,刚才没看清楚,你说的是阳性菌。我却说了个阴性菌。所以,我不能够说是否可以直接做PCR。但是通过水煮可以做结核菌菌落。你可参考。
6楼2015-02-08 15:38:46
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-02-09 10:35:48
maolilv: 金币+20, 有帮助, 试过了,必须提质粒PCR,煮沸、冷冻,溶菌酶处理,都不好使。 2015-03-24 14:20:36
革兰氏阳性菌要沸水煮个10-15in,然后12000离心5-10min,取上清做PCR。
我们实验室做农杆菌GV3101就这么做的。
你可以自己试试煮和不煮有什么区别。
7楼2015-02-09 09:49:56
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quanweizhuce

木虫 (小有名气)

内容已删除
8楼2015-11-04 15:33:07
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