应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于T4和solution I 的连接问题
61/1返回列表
查看: 7359  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于T4和solution I 的连接问题 已有3人参与

酶切液用T4的连接效果不是很好，后来有人告知可以用T载体中的solution I 连接。
原体系是这样的： 酶切液                10ul
                             R-Adaptor            2ul
                            10XLigase buffer    2 ul
                            T4 DNA Ligase       2ul
                            水                          4ul
                    总共是20ul。
现在换成solution I 连接，请问体系该怎么样变？就 酶切液、R-Adaptor  、水、solution I 四样构成一个新体系，还需要其他吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-17 22:06:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijianfu12

银虫 (正式写手)
就按照说明书

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼
好好搞学术
2楼2014-09-18 00:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-18 18:29:49
酶切后要胶回收，不能直接用酶切液体做连接！T连接很容易，你上面的体系的有问题，一般连接前最好计算下载体与片断的摩尔比，一般1：3-1：10之间都非常好连接！solution I 里面包括Ligase buffer  和 T4 DNA Ligase ，用量是2倍的！10UL体系就用5UL的 solution I ！个人认为楼主不是酶的问题，主要还是楼主体系没有计算和酶切产物没有胶回收！
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-18 08:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凤丫头1988

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弱弱问一句，  R-Adaptor 是什么啊
赞一下 回复此楼
最小的事情也要尽力
4楼2014-09-18 08:44:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒心季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-18 08:37:19
酶切后要胶回收，不能直接用酶切液体做连接！T连接很容易，你上面的体系的有问题，一般连接前最好计算下载体与片断的摩尔比，一般1：3-1：10之间都非常好连接！solution I 里面包括Ligase buffer  和 T4 DNA Ligase ...

感谢回复！我是按照实验室的博士论文指导来做的。它这里的酶切液酶切的是双链cDNA，酶切后并未要求胶回收，体系也是按照指导来的，应该不会有太大问题。
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-18 10:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-18 18:30:00
DNA混合物与Solution I按照1：1混合就行。
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-18 17:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 寒心季 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 20:32 by 3VGOm6paSgqv
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 5/250 2026-08-02 20:31 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 20:24 by 3VGOm6paSgqv
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 20:21 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 12/600 2026-08-02 20:21 by drbart
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 7/350 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 11/550 2026-08-02 20:11 by 3VGOm6paSgqv
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:04 by 3VGOm6paSgqv
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 13/650 2026-08-02 20:04 by 3VGOm6paSgqv
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 10/500 2026-08-02 20:03 by 3VGOm6paSgqv
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 17/850 2026-08-02 19:54 by 3VGOm6paSgqv
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 6/300 2026-08-02 18:34 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 15/750 2026-08-02 16:23 by jHcrHMhbKCFV
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 10/500 2026-08-02 10:00 by 锦衣卫寒战
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 7/350 2026-08-02 07:59 by 88817753
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭