24小时热门版块排行榜    

查看: 7074  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于T4和solution I 的连接问题 已有3人参与

酶切液用T4的连接效果不是很好,后来有人告知可以用T载体中的solution I 连接。
原体系是这样的: 酶切液                10ul
                             R-Adaptor            2ul
                            10XLigase buffer    2 ul
                            T4 DNA Ligase       2ul
                            水                          4ul
                    总共是20ul。
现在换成solution I 连接,请问体系该怎么样变?就 酶切液、R-Adaptor  、水、solution I 四样构成一个新体系,还需要其他吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-18 18:29:49
酶切后要胶回收,不能直接用酶切液体做连接!T连接很容易,你上面的体系的有问题,一般连接前最好计算下载体与片断的摩尔比,一般1:3-1:10之间都非常好连接!solution I 里面包括Ligase buffer  和 T4 DNA Ligase ,用量是2倍的!10UL体系就用5UL的 solution I !个人认为楼主不是酶的问题,主要还是楼主体系没有计算和酶切产物没有胶回收!
3楼2014-09-18 08:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lijianfu12

银虫 (正式写手)

就按照说明书

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
2楼2014-09-18 00:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凤丫头1988

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
弱弱问一句,  R-Adaptor 是什么啊
最小的事情也要尽力
4楼2014-09-18 08:44:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒心季

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by huyan0817 at 2014-09-18 08:37:19
酶切后要胶回收,不能直接用酶切液体做连接!T连接很容易,你上面的体系的有问题,一般连接前最好计算下载体与片断的摩尔比,一般1:3-1:10之间都非常好连接!solution I 里面包括Ligase buffer  和 T4 DNA Ligase ...

感谢回复!我是按照实验室的博士论文指导来做的。它这里的酶切液酶切的是双链cDNA,酶切后并未要求胶回收,体系也是按照指导来的,应该不会有太大问题。
5楼2014-09-18 10:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856调剂,是学校就去 +7 sllhht 2026-03-19 8/400 2026-03-20 09:30 by 每天只摆一小会
[考研] 265求调剂 +8 梁梁校校 2026-03-19 8/400 2026-03-20 09:08 by 每天只摆一小会
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +6 Doleres 2026-03-19 6/300 2026-03-20 09:03 by xingguangj
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 6/300 2026-03-19 14:16 by 申子申申
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见