应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » pet28a 空质粒双酶切图像问题
51/1返回列表
查看: 5179  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] pet28a 空质粒双酶切图像问题 已有1人参与

本人新手，最近做蛋白表达，前期做克隆，想先把表达载体空质粒pet28a双酶切 空质粒大小5369bp，但是图像把我搞迷糊了，希望各位高手指点迷津
第一张图是第一个孔是2000Marker 当时加错了
第二个孔 BamH I和EcoR I 双酶切 pet28a
第三个是先BamH I单酶切再EcoR I单酶切
第四个是EcoR I SaL I 双酶切
第五个是15000Marker 提pet28a质粒浓度比较低，用的洗脱水80ul 体系10ul buffer2ul 质粒6ul 酶各1ul 正常情况双酶切应该有两个片段，我的为什么只有一个 小片段呢 ，
还有看pet28a图谱 BamH I和EcoR I两个酶挨着 有人说不能切？我的图是切下来了吗？不然怎么会有小片段


第二张图第一个孔15000Marker
2-7都是双酶切就是酶用的不一样，可惜忘记加空质粒对照了 但是6.7buffer加错了BamH I和SaL I应该加Tbuffer 我加了H buffer 好像没切下来 看图像比前四个高一点 应该可以当做空质粒对照吧，是不是可以证明前四个切下来了 就是切下来的片段太小了浓度太低 看不到？
这张图是只有载体 没有目的片段 我真不知道切没切下来 体系20ul 载体8ul 酶各0.5ul buffer2ul 加 ddH2O到20ul 提空质粒时加洗脱水80ul同样浓度很低
综合分析这两个图 体系不同 一个有小片段，一个只有质粒 这是什么原因 怎么改进？另外BamH I和EcoR I到底能不能切pet28a啊？

pet28a 空质粒双酶切图像问题
3J%06B$}86)2SNJG~2X]HO6.jpg


pet28a 空质粒双酶切图像问题-1
D79158FB275241E5AA31F57F2AEC522B.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-10 22:04:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 95846713 at 2014-09-11 08:16:56
第一个图确实在2000marker的右边的片段高于2000bp，但是和15000marker 比对刚过最后一个250bp啊？到底和哪个比对才准确呢？...

那是你15000marker跑的有问题，好好对一下。
赞一下 回复此楼
8楼2014-09-11 09:46:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-11 09:24:03
1.你选的BamH I和EcoR I在空载上相隔8个碱基，EcoR I和 SaL I在空载上相隔20个碱基，后一对组合更容易完全酶切，前一对组合是有可能只被切一次。
2.两对组合切下来的小片段都不能通过琼脂糖电泳显示出来，不明白你说的小片段指的哪条带？我没有看到。
3.因为单酶切与双酶切产生的大片段大小非常接近，是否完全双酶切无法通过电泳判断。
赞一下 回复此楼
2楼2014-09-10 22:45:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

95846713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-09-10 22:45:58
1.你选的BamH I和EcoR I在空载上相隔8个碱基，EcoR I和 SaL I在空载上相隔20个碱基，后一对组合更容易完全酶切，前一对组合是有可能只被切一次。
2.两对组合切下来的小片段都不能通过琼脂糖电泳显示出来，不明白你 ...

哦  我说的小片段就是从空载体双酶切切下来的片段 应该在200.300左右吧    你说我第一个图显示的条带是不是这种小片段啊？出现这种现象的原因是什么啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-10 22:54:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 95846713 at 2014-09-10 22:54:59
哦  我说的小片段就是从空载体双酶切切下来的片段 应该在200.300左右吧    你说我第一个图显示的条带是不是这种小片段啊？出现这种现象的原因是什么啊...

200-300?你怎么算的？好好看下pET28的载体图
第一个图里是大片段，大小都已经超过2000了，和你15000marker对一下就知道具体多大。
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-10 23:32:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 10/500 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 材料专硕英一数二306 +4 z1z2z3879 2026-03-18 4/200 2026-03-18 20:00 by 楤哥
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +9 秋有木北 2026-03-14 9/450 2026-03-18 19:49 by macy2011
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +6 慕寒mio 2026-03-16 6/300 2026-03-18 14:26 by 007_lilei
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭