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pet28a 空质粒双酶切图像问题 已有1人参与
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本人新手，最近做蛋白表达，前期做克隆，想先把表达载体空质粒pet28a双酶切 空质粒大小5369bp，但是图像把我搞迷糊了，希望各位高手指点迷津 第一张图是第一个孔是2000Marker 当时加错了 第二个孔 BamH I和EcoR I 双酶切 pet28a 第三个是先BamH I单酶切再EcoR I单酶切 第四个是EcoR I SaL I 双酶切 第五个是15000Marker 提pet28a质粒浓度比较低，用的洗脱水80ul 体系10ul buffer2ul 质粒6ul 酶各1ul 正常情况双酶切应该有两个片段，我的为什么只有一个 小片段呢 ， 还有看pet28a图谱 BamH I和EcoR I两个酶挨着 有人说不能切？我的图是切下来了吗？不然怎么会有小片段 第二张图第一个孔15000Marker 2-7都是双酶切就是酶用的不一样，可惜忘记加空质粒对照了 但是6.7buffer加错了BamH I和SaL I应该加Tbuffer 我加了H buffer 好像没切下来 看图像比前四个高一点 应该可以当做空质粒对照吧，是不是可以证明前四个切下来了 就是切下来的片段太小了浓度太低 看不到？ 这张图是只有载体 没有目的片段 我真不知道切没切下来 体系20ul 载体8ul 酶各0.5ul buffer2ul 加 ddH2O到20ul 提空质粒时加洗脱水80ul同样浓度很低 综合分析这两个图 体系不同 一个有小片段，一个只有质粒 这是什么原因 怎么改进？另外BamH I和EcoR I到底能不能切pet28a啊？  3J%06B$}86)2SNJG~2X]HO6.jpg  D79158FB275241E5AA31F57F2AEC522B.jpg |
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