| 查看: 2246 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
Bioexperixgs新虫 (正式写手)
|
[求助]
酵母基因组提取问题
|
|
|
各位大神，本人核酸提取新手一枚，依据分子克隆上酵母基因组微量提取的方法并稍加改进抽提念珠菌基因组，现抽提的基因组无RNA污染，无降解，就是有点不知道是蛋白质还是多糖之类的杂质，求大神指点，去除杂质的方法，抽提步骤如下 （1） 取1ml过夜培养菌液，离心收集菌体，菌体用1mL PBS洗涤2次，最大转速离心1min收集菌体； （2） 加入500μL山梨醇缓冲液重悬菌体，混匀后加入50U Lyticase，37℃分别水浴4h； （3） 12000rpm离心1min，收集沉淀； （4） 沉淀中加入500μL酵母缓冲液重悬混匀，加入50μL 10%SDS，迅速混匀后置于65℃水浴30min； （5） 加入200μL 5M KAc（pH8.9），混匀后冰浴1h； （6） 12000rpm,4℃离心5min，转移上清于新的EP管中； （7） 加入等体积的异丙醇，12000rpm离心10s； （8） 弃上清，沉淀自然干燥10min； （9） 沉淀加入300μL TE（含RNase）缓冲液溶解，37℃水浴消化RNA 1h； （10）加入等体积酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，充分混匀后12000rpm离心5min； （11）取上层水相于新的EP管中，加入1/10体积的3M NaAc，等体积的异丙醇，混匀后12000rpm离心1min； （12）加入500μL 75%乙醇洗涤DNA，12000rpm离心1min； （13）弃上清，沉淀于室温自然干燥；然后加入50μL TE缓冲液溶解； （14）取出5μL用于1%琼脂糖凝胶电泳检测，剩余溶液于-20℃中保存备用。  IMG_2000.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有67人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酵母基因组提取
已经有13人回复
- 去除基因组DNA的原理是什么？具体点！
已经有4人回复
- 提取基因组DNA发生一件很奇怪的事情
已经有21人回复
- 细菌基因组提取
已经有4人回复
- 基因组DNA不纯
已经有7人回复
- 红酵母油脂的提取
已经有5人回复
- 总是提不出来细菌基因组DNA
已经有11人回复
- 关于DNase1 去除提取的RNA中基因组DNA的问题
已经有12人回复
- 关于酵母细胞破壁
已经有21人回复
- 将目的基因整合到哺乳动物细胞基因组上的方法有哪些？随机or定点？
已经有10人回复
- 酵母基因组DNA中的RNA怎么去除不掉？
已经有10人回复
- 基因组PCR的问题
已经有3人回复
- 手提基因组方法遇到的问题
已经有12人回复
- 酵母RNA提取问题
已经有10人回复
- 基因组DNA提取问题
已经有32人回复
- 提取NDVI出问题了
已经有12人回复
- 全血基因组的提取问题
已经有6人回复
- 真菌基因组DAN提取图片，求高人指点
已经有20人回复
- 酵母 基因组提取问题
已经有8人回复
- 重组酿酒酵母转化子筛选的问题
已经有12人回复
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- 【求助/交流】DNA提取过程中所用到试剂的作用
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】酵母菌落PCR
已经有12人回复
- 【求助/交流】有关酵母的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于酵母X33电转的问题
已经有8人回复
- 求助 基因工程菌保藏问题
已经有11人回复
Bioexperixgs
新虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 672.9
- 散金: 337
- 红花: 8
- 帖子: 330
- 在线: 39.2小时
- 虫号: 2330746
- 注册: 2013-03-08
- 专业: 病原微生物变异与耐药
3楼2016-03-07 13:39:17
小马奔腾0217
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 73.5
- 帖子: 28
- 在线: 33.3小时
- 虫号: 3162013
- 注册: 2014-04-25
- 性别: MM
- 专业: 有机高分子功能材料
2楼2015-06-15 11:49:25
4楼2016-03-07 15:49:46
Bioexperixgs
新虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 672.9
- 散金: 337
- 红花: 8
- 帖子: 330
- 在线: 39.2小时
- 虫号: 2330746
- 注册: 2013-03-08
- 专业: 病原微生物变异与耐药
5楼2016-03-07 16:03:24
20