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lijunzjut

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白成功表达,却没有活性,换个表达系统有必要吗? 已有2人参与

各位大虾,求助一个问题。
      从霉菌里克隆出一段酶的基因,经过稀有密码子修饰,成功表达在大肠(BL21)里, 经过sds-page检测发现在上清液里的确出现了清晰条带,说明我的蛋白可以可溶性表达,但是在检测酶的活性时,发现其活性极低(有,但可以忽略不计),请问,有没有必要尝试表达在酵母系统里再试试。蛋白在不同的系统里活性会有质的区别吗?毕竟我是真核表达在原核里。求大家支招。谢谢。
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lijunzjut

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2014-09-05 15:51:53
两种处理方法:
1、换真核系统,比如酵母,因为可能是由于大肠杆菌系统中没有辅助你目标蛋白折叠的酶系统;PS:大肠自己一般不能进行表达后修饰
2、体外复性。培养过程中添加低分子量的巯基或二硫化合物,促进二硫 ...

好的,知道了。
6楼2014-09-06 10:27:09
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lijunzjut: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-06 10:27:38
两种处理方法:
1、换真核系统,比如酵母,因为可能是由于大肠杆菌系统中没有辅助你目标蛋白折叠的酶系统;PS:大肠自己一般不能进行表达后修饰
2、体外复性。培养过程中添加低分子量的巯基或二硫化合物,促进二硫键的形成。
2楼2014-09-05 15:51:53
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lijunzjut: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-09-06 10:27:47
必须换酵母,我做过一个丝状真菌的淀粉酶,大肠表达一点活性都没有,换到酵母系统,活性很高,绝对是这个原因

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-09-05 20:49:11
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小小cool

金虫 (正式写手)

推荐用pcold1-sumo载体

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-09-05 20:55:25
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