应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题
101/1返回列表
查看: 1383  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题

请问：如果重组表达纯化的蛋白是一种酶，这种酶没有辅因子的话就没有活性，那么表达纯化透析出来的蛋白有活性吗？换句话说就是，重组表达出来的蛋白包含辅因子吗？还是需要后续实验加上辅因子？

还有就是如果这个酶是二聚体或者四聚体的话，那么表达纯化复性出来的是单体还是就是x聚体了？%>_<%

想不明白这个问题...+_+

请大家都说说看昂...%>_<%
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-11 16:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
抢个座，顶一下
回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2013-01-11 17:06:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-26 21:09:21
在小量表达成活性形式时，cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体，或者由于大量表达，即使可溶，宿主合成的cofactor是不够的，需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体，一般在复性后就会形成多聚体的形式。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-01-12 07:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 07:26:28
在小量表达成活性形式时，cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体，或者由于大量表达，即使可溶，宿主合成的cofactor是不够的，需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体， ...

我觉着也应该是这样，可是我的蛋白在包涵体里表达，纯化出来以后检测竟然有活性，所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩)O谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-12 10:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ice清玉 at 2013-01-12 10:58:02
我觉着也应该是这样，可是我的蛋白在包涵体里表达，纯化出来以后检测竟然有活性，所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩) ...

你是指复性时没加辅助因子，但还是有活性的？这还真有些意外。不管怎么说，得到有活性的产物还是很好的。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-12 11:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 11:45:20
你是指复性时没加辅助因子，但还是有活性的？这还真有些意外。不管怎么说，得到有活性的产物还是很好的。...

对，复性时我还没想到这一点，所以没有加辅因子，后来看这种酶的介绍忽然起来辅因子的事。辅因子是直接加到透析液里就可以了吗？用量什么的怎么控制？我的辅因子是FAD
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-12 12:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
ice清玉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-26 21:09:39
如果你知道每个酶分子结合FAD的数目，可以按照mol比加在透析液里。或者你先大量纯化出没有FAD的酶，定量后再取一部分去结合FAD，再与原来的apo形式的酶比较酶活性。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-01-13 01:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoshanshan1

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我现在做的就是一种蛋白，它的辅酶就是FAD，而且我还有做纯化出来的蛋白紫外可见吸收联系光谱图的检测
赞一下 回复此楼
正能量
8楼2013-03-08 15:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by caoshanshan1 at 2013-03-08 15:33:15
我现在做的就是一种蛋白，它的辅酶就是FAD，而且我还有做纯化出来的蛋白紫外可见吸收联系光谱图的检测

那你是重组表达的么?
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-03 21:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

summer沙

新虫 (初入文坛)
求各位大神帮忙啊，关于南极细菌GPX基因与蛋白的资料与文献啊，求虫有，求大神啊！
赞一下 回复此楼
10楼2013-05-09 19:02:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ice清玉 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +8 February_Feb 2026-03-01 10/500 2026-03-01 16:48 by sunny81
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料化工调剂 +9 今夏不夏 2026-03-01 10/500 2026-03-01 16:01 by hmn_wj
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 291分工科求调剂 +8 science饿饿 2026-03-01 9/450 2026-03-01 14:22 by Ducount.Y
[考研] 材料学调剂 +8 提神豆沙包 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:14 by peike
[考研] 0856材料求调剂 +3 麻辣鱿鱼 2026-02-28 3/150 2026-03-01 14:06 by yc258
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 290求调剂 +8 材料专硕调剂； 2026-02-28 9/450 2026-03-01 12:46 by 闭眼看蓝天
[考研] 0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信 +6 zyf上岸 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:43 by liqiongjy
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +3 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 6/300 2026-03-01 11:50 by gaoxiaoniuma
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭