24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1452  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题

请问:如果重组表达纯化的蛋白是一种酶,这种酶没有辅因子的话就没有活性,那么表达纯化透析出来的蛋白有活性吗?换句话说就是,重组表达出来的蛋白包含辅因子吗?还是需要后续实验加上辅因子?

还有就是如果这个酶是二聚体或者四聚体的话,那么表达纯化复性出来的是单体还是就是x聚体了?%>_<%

想不明白这个问题...+_+

请大家都说说看昂...%>_<%
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by caoshanshan1 at 2013-03-08 15:33:15
我现在做的就是一种蛋白,它的辅酶就是FAD,而且我还有做纯化出来的蛋白紫外可见吸收联系光谱图的检测

那你是重组表达的么?
9楼2013-04-03 21:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-04-26 21:09:21
在小量表达成活性形式时,cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体,或者由于大量表达,即使可溶,宿主合成的cofactor是不够的,需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体,一般在复性后就会形成多聚体的形式。
3楼2013-01-12 07:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 07:26:28
在小量表达成活性形式时,cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体,或者由于大量表达,即使可溶,宿主合成的cofactor是不够的,需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体, ...

我觉着也应该是这样,可是我的蛋白在包涵体里表达,纯化出来以后检测竟然有活性,所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩)O谢谢
4楼2013-01-12 10:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ice清玉 at 2013-01-12 10:58:02
我觉着也应该是这样,可是我的蛋白在包涵体里表达,纯化出来以后检测竟然有活性,所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩) ...

你是指复性时没加辅助因子,但还是有活性的?这还真有些意外。不管怎么说,得到有活性的产物还是很好的。
5楼2013-01-12 11:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 300求调剂 +9 橙a777 2026-04-15 9/450 2026-04-16 06:47 by fenglj492
[考研] 恳请有学校收留 +5 柯淮然 2026-04-12 5/250 2026-04-15 21:49 by noqvsozv
[考研] 化学070300 求调剂 +23 哈哈哈^_^ 2026-04-12 23/1150 2026-04-14 16:30 by zhouxiaoyu
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 071000生物学调剂求助 +18 zzzzwww 2026-04-09 21/1050 2026-04-14 15:39 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 求调剂,985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
信息提示
请填处理意见