应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题
51/1返回列表
查看: 1668  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题

请问：如果重组表达纯化的蛋白是一种酶，这种酶没有辅因子的话就没有活性，那么表达纯化透析出来的蛋白有活性吗？换句话说就是，重组表达出来的蛋白包含辅因子吗？还是需要后续实验加上辅因子？

还有就是如果这个酶是二聚体或者四聚体的话，那么表达纯化复性出来的是单体还是就是x聚体了？%>_<%

想不明白这个问题...+_+

请大家都说说看昂...%>_<%
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-11 16:12:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ice清玉 at 2013-01-12 10:58:02
我觉着也应该是这样，可是我的蛋白在包涵体里表达，纯化出来以后检测竟然有活性，所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩) ...

你是指复性时没加辅助因子，但还是有活性的？这还真有些意外。不管怎么说，得到有活性的产物还是很好的。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-12 11:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-26 21:09:21
在小量表达成活性形式时，cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体，或者由于大量表达，即使可溶，宿主合成的cofactor是不够的，需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体，一般在复性后就会形成多聚体的形式。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-01-12 07:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 07:26:28
在小量表达成活性形式时，cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体，或者由于大量表达，即使可溶，宿主合成的cofactor是不够的，需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体， ...

我觉着也应该是这样，可是我的蛋白在包涵体里表达，纯化出来以后检测竟然有活性，所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩)O谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-12 10:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 11:45:20
你是指复性时没加辅助因子，但还是有活性的？这还真有些意外。不管怎么说，得到有活性的产物还是很好的。...

对，复性时我还没想到这一点，所以没有加辅因子，后来看这种酶的介绍忽然起来辅因子的事。辅因子是直接加到透析液里就可以了吗？用量什么的怎么控制？我的辅因子是FAD
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-12 12:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 找导师 +3 yuanjiabao 2026-08-29 4/200 2026-08-30 08:09 by zjb_nudt
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 07:05 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:51 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭