24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1446  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组表达纯化出的蛋白的酶活性问题

请问:如果重组表达纯化的蛋白是一种酶,这种酶没有辅因子的话就没有活性,那么表达纯化透析出来的蛋白有活性吗?换句话说就是,重组表达出来的蛋白包含辅因子吗?还是需要后续实验加上辅因子?

还有就是如果这个酶是二聚体或者四聚体的话,那么表达纯化复性出来的是单体还是就是x聚体了?%>_<%

想不明白这个问题...+_+

请大家都说说看昂...%>_<%
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ice清玉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-04-26 21:09:21
在小量表达成活性形式时,cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体,或者由于大量表达,即使可溶,宿主合成的cofactor是不够的,需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体,一般在复性后就会形成多聚体的形式。
3楼2013-01-12 07:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 07:26:28
在小量表达成活性形式时,cofactor一般是利用宿主合成的结合上去的。但大量表达时往往形成不具活性的包涵体,或者由于大量表达,即使可溶,宿主合成的cofactor是不够的,需要复性人为加入才有活性。如果酶是寡聚体, ...

我觉着也应该是这样,可是我的蛋白在包涵体里表达,纯化出来以后检测竟然有活性,所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩)O谢谢
4楼2013-01-12 10:58:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ice清玉 at 2013-01-12 10:58:02
我觉着也应该是这样,可是我的蛋白在包涵体里表达,纯化出来以后检测竟然有活性,所以我很疑惑。我对自己的检测方式也不是很有信心。我再表达一批蛋白试着在复性透析液里加入辅因子看看有没有什么区别吧。O(∩_∩) ...

你是指复性时没加辅助因子,但还是有活性的?这还真有些意外。不管怎么说,得到有活性的产物还是很好的。
5楼2013-01-12 11:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 11:45:20
你是指复性时没加辅助因子,但还是有活性的?这还真有些意外。不管怎么说,得到有活性的产物还是很好的。...

对,复性时我还没想到这一点,所以没有加辅因子,后来看这种酶的介绍忽然起来辅因子的事。辅因子是直接加到透析液里就可以了吗?用量什么的怎么控制?我的辅因子是FAD
6楼2013-01-12 12:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂 +3 李的Lucky 2026-04-10 3/150 2026-04-15 23:54 by 陈皮皮
[考研] 急需调剂 +5 绝不放弃22 2026-04-15 5/250 2026-04-15 23:11 by Tide man
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 6/300 2026-04-14 16:40 by zhouxiaoyu
[考研] 279求调剂 +12 张番茄不炒蛋 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:38 by zs92450
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:37 by zs92450
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 302求调剂 +10 易!? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 一志愿中科大070300化学,314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
信息提示
请填处理意见