应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE后，考染有条带，WB后检测不到目的蛋白。
81/1返回列表
查看: 3671  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

陈雪123

铁虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE后，考染有条带，WB后检测不到目的蛋白。 已有5人参与

最近在做WB，目的蛋白大小在21.5 kD。却总是检测不到目的蛋白。可能是因为蛋白浓度太低了。搜了一下，浓缩方法有很多。不知道该选择什么方法？现在有4 mL蛋白。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
有生之年，做最好的自己，不留遗憾。
1楼 2014-08-25 10:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考染出来的条带也不一定就是你的目的蛋白。你蛋白浓度是多少？上样多大体积。如果浓缩，用冷冻干燥。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-25 12:10:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

陈雪123

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-08-25 12:10:37
考染出来的条带也不一定就是你的目的蛋白。你蛋白浓度是多少？上样多大体积。如果浓缩，用冷冻干燥。

蛋白浓度没有测定，20 μL蛋白上样缓冲液加80 μL蛋白煮沸10 min。上样5 μL，也有一次上样10 μL。冷冻干燥的话，俺们没有冷冻干燥器。还有其他办法吗？在不损失蛋白的情况下。
赞一下 回复此楼
有生之年，做最好的自己，不留遗憾。
3楼2014-08-25 12:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 陈雪123 at 2014-08-25 12:31:22
蛋白浓度没有测定，20 μL蛋白上样缓冲液加80 μL蛋白煮沸10 min。上样5 μL，也有一次上样10 μL。冷冻干燥的话，俺们没有冷冻干燥器。还有其他办法吗？在不损失蛋白的情况下。...

建议测个蛋白浓度。我没想出除冷冻干燥外还有什么好的办法。下次提蛋白时把细胞多弄点裂解。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-25 16:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ahhngwj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定你目的抗体没有问题么？或者是抗体出问题了，抓不出条带也有可能
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-26 08:43:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你考染都出来条带了，我觉得是你WB出了问题，首先是转膜确定转过去了，做WB电泳胶约薄越好，另外你的抗体有没有问题，还有你确定那蛋白是你要的蛋白吗，不能光靠分子量确定是不是你的蛋白，要不然你做WB干什么，如果你就想浓缩，简单的用透析袋，或者超滤。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-08-26 10:55:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果仅仅是浓缩蛋白质，还是先用超滤，在进行低温冻干。
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-24 15:50:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qq263671900

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你首先考虑的不是浓缩蛋白，一般情况下，如果sds能看见满意的带，说明蛋白浓度是可以开始wb的，我建议你仔细想想你的wb操作，最好的办法就是加一个positive control在里面，确认wb环节没有问题
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-26 07:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 陈雪123 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料085601调剂 +16 何润采123 2026-04-10 17/850 2026-04-10 12:22 by 奥特曼的小怪兽
[考研] 材料类284调剂 +34 想换手机不想解� 2026-04-08 41/2050 2026-04-10 11:51 by wp06
[考研] 298求调剂 +8 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 8/400 2026-04-10 10:18 by 木子君1218
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +3 0856?调剂 2026-04-10 3/150 2026-04-10 09:45 by yutian743
[考研] 277求调剂 +19 倪建设 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:24 by guosr9609
[考研] 268分085602化学工程调剂 +24 月照花林。 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 08:09 by Sammy2
[考研] 291分调剂 +3 上岸小莹加油 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:28 by 1753564080
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 368化学求调剂 +13 wwwwabcde 2026-04-07 14/700 2026-04-09 14:47 by heaven_jay
[考研] 26考研调剂0710 0860 +10 补补不补 2026-04-03 15/750 2026-04-09 11:13 by ditto77778
[考研] 一志愿北京2，材料与化工308求调剂 +17 熊二想上岸 2026-04-04 18/900 2026-04-09 09:13 by leyan1127
[考研] 285求调剂 +7 恶法大二的气味� 2026-04-05 10/500 2026-04-08 14:34 by zhq0425
[考研] 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-04 4/200 2026-04-08 08:41 by barlinike
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 287分求调剂 有专利国奖一志愿哈工大085406 +6 白易辰 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:46 by 875465
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭