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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导后，考染后什么蛋白条带都没有
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c3024034

银虫 (正式写手)

[求助] IPTG诱导后，考染后什么蛋白条带都没有

IPTG未诱导前，考染后还有蛋白条带，诱导后却一片空白，一条带也没有，
请大侠帮我分析原因。
谢谢。
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1楼2012-02-19 17:22:49
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能不能具体点，诱导后蛋白不表达问题很多，例如载体构建问题....
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2楼2012-02-19 17:49:52
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-19 17:49:52:
能不能具体点，诱导后蛋白不表达问题很多，例如载体构建问题....

不是不表达我的目的蛋白，而是和对照相比，那个泳道一条带都没有。二对照很多带啊，什么原因啊？
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3楼2012-02-19 19:15:03
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jingzhang08

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励积极应助哦 2012-02-20 08:14:57
c3024034(金币+2): ★★★很有帮助 我试试吧 2012-02-21 15:22:54
是说诱导前直接提蛋白，有band;诱导后再提的蛋白，就没有了是吧
重复过几次？都是这样？
有没可能诱导表达时间过长，形成inclusion body了？可是这样子也不会一条条带都没有啊。
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4楼2012-02-19 22:30:53
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-19 17:49:52:
能不能具体点，诱导后蛋白不表达问题很多，例如载体构建问题....

这个确实有点诡异，真想不明白是怎么回事。
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5楼2012-02-20 12:12:24
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by jingzhang08 at 2012-02-19 22:30:53:
是说诱导前直接提蛋白，有band;诱导后再提的蛋白，就没有了是吧
重复过几次？都是这样？
有没可能诱导表达时间过长，形成inclusion body了？可是这样子也不会一条条带都没有啊。

重复了两次了，都是这样。 我是诱导后，加LOADING 后直接煮后上样。
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6楼2012-02-20 14:32:05
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-20 12:12:24:
这个确实有点诡异，真想不明白是怎么回事。

1确实诡异，做实验什么情况都出现了。很无奈啊
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7楼2012-02-20 14:32:45
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whb21

木虫 (著名写手)
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-02-22 18:39:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by whb21 at 2012-02-20 12:12:24:
这个确实有点诡异，真想不明白是怎么回事。

你的蛋白是胞内表达还是胞外表达？既然空白对照能跑出条带，加IPTG后不至于没有条带啊，建议你诱导后将菌体离心，对沉淀和上清分别跑胶
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8楼2012-02-21 09:28:59
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jingbing94

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
和诱导前上杨样量是否一致，可能表达蛋白是毒蛋白，诱导后细菌死掉了，可以诱导后简单看下浑浊度，或测测OD值
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9楼2012-02-21 15:24:13
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c3024034

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by jingbing94 at 2012-02-21 15:24:13:
和诱导前上杨样量是否一致，可能表达蛋白是毒蛋白，诱导后细菌死掉了，可以诱导后简单看下浑浊度，或测测OD值

空载体也发生一样的情况，但只有一条带，而重组的是一条都没有，泳道都是白的一片。
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10楼2012-02-21 22:33:29
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