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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 求助！单体蛋白在SDS-PAGE中出现了倍数关系的大条带！
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老狗1989

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！单体蛋白在SDS-PAGE中出现了倍数关系的大条带！

我的单体蛋白约15.6KD，在与某二肽混合贮存一段时间之后，加Loading buffer、95℃ 5min、高速离心、跑SDS-PAGE,考染脱色后在胶上看到了倍数关系的大条带，求各位帮忙解释。。。。。
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1楼2013-03-31 11:28:10
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myprayer

专家顾问 (著名写手)

优秀版主
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 这段文字非常眼熟，以后请少复制粘帖，最好能有针对性的回答 2013-04-01 08:41:11
一 ：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里面有配置浓度的指导。
二：就是胶带里位置梯度的PH浓度是否合理，分离胶的浓度一般情况下比较低，所以合适的PH也是做出perfect胶的利器。
三：就是所选用的染料或自发荧光的问题，选择性的使用考马斯亮蓝R-250通常，银盐染料，violet17或者溴化乙锭等染色，这个你可以看一下之前的实验是怎么进行的。
四：可能是你的胶带分离后暗室X放射自显的时候没有曝光好。
五：当时梳子的之后注射混进去微小的气泡，导致胶带不均匀。
最差的就是和之前有人提供的一样，一些试剂可能是假冒伪劣产品，也不排除这种情况。
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2楼2013-03-31 22:44:30
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多肽合成服务

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2013-04-01 09:34:22
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遥控器68

金虫 (小有名气)
路过，求图看真相
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4楼2013-04-01 10:21:57
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Jarviswu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的loading buffer中加BE了没有？如果没加的话，那个大条带就是二聚体或多聚体。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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如果想做好它，就把它视为“朋友”：蛋白质，冷泉港！
5楼2013-04-01 12:22:32
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老狗1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-03-31 22:44:30
一 ：试着看下当时配置浓缩胶和分离胶的参数比例，是不是和你要测的蛋白质样品的分子量大小合适，这个可以参考相关文献或者有蛋白质样品对照库里面有配置浓度的指导。
二：就是胶带里位置梯度的PH浓度是否合理，分 ...

只是我实验组跟对照组的现象差别很明显。。。实验组出现大条带是正常的，因此想问问各位虫友这是大概是什么原因。。
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6楼2013-04-01 15:28:57
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老狗1989

新虫 (初入文坛)
★
wizardfan: 金币+1, 感谢提供图片，以后最好在发帖求助的时候就直接提供 2013-04-02 08:20:49
引用回帖:
4楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-04-01 10:21:57
路过，求图看真相

有大条带的是实验组，旁边是对照组。。。

未命名333.jpg
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7楼2013-04-01 15:31:48
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遥控器68

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 老狗1989 at 2013-04-01 15:31:48
有大条带的是实验组，旁边是对照组。。。

未命名333.jpg
...

你的蛋白和二肽分别是什么，或者是什么关系呢？
从图看，如果最左边甬道是marker的话，那么胶跑得可不太好。15.6kd是小分子量的，但是不至于跑成这样子。
你的二肽多大，什么方法提取的蛋白能同时说明一下么
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8楼2013-04-02 13:17:54
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的实验组和对照组有什么区别?如果是从细胞来的蛋白,可能是ubiquitination或者glycosylation.也可能是oligomerization,别太迷信SDS的能力. 你的sample buffer理有没有beta-merceptomethanol or DTT?如果没有或不足,也可能是disulphide bond
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9楼2013-04-03 13:20:35
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