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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为何会有如此多的条带？？？
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zj251989

新虫 (小有名气)

[求助] 为何会有如此多的条带？？？ 已有3人参与

大家好，我最近正在做关于分子上的克隆，但是根据NCBI上设计的引物，因为表达我要蛋白的基因有很多种，然后我就设计了两对引物，老师给的菌没有具体的种属，然后提出基因组，PCR出如图一样的效果，我本身两段目的片段是有1000bp左右，但是看着图我凌乱了，不知道该怎么办？求各位大神给给意见。。。。。。。

为何会有如此多的条带？？？
2000bp的marke


为何会有如此多的条带？？？-1
2000bp的marke
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1楼 2014-08-19 15:16:31
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zj251989 at 2014-08-20 11:04:43
还有个问题请教一下，我的菌种是分支杆菌NRRLB-3805，但是为什么在NCBI上找不到它的基因组序列？...

我对分支杆菌NRRLB-3805不是很熟悉，在NCBI上能不能查到，首先你得确定你这个物种的全基因组是否测序，如果没测序就找不到；你只能根据亲缘关系近的物种中的相关基因座比对，作为参照。
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7楼2014-08-20 11:28:40
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zj251989: 金币+2, ★有帮助 2014-08-20 11:07:03
基因组不知道具体的种属
设计引物是根据什么种属的设计？
这样扩增出来是什么基因都不知道啊  
是老师不知道 还是没说
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2楼2014-08-19 16:40:23
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zj251989(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:24:13
zj251989: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-20 11:01:29
个人看法：
图1的第一泳道是有主带的，1000bp左右。你可以适当提高退火温度，这样可能会减少些杂带（PCR有杂带也是挺正常的）。
不知道你的下一步实验是什么，如果是做克隆的话，那就切胶回收，连上载体测序，就知道是不是你想要的序列了。
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3楼2014-08-19 16:40:58
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zj251989

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuihaizi at 2014-08-19 16:40:58
个人看法：
图1的第一泳道是有主带的，1000bp左右。你可以适当提高退火温度，这样可能会减少些杂带（PCR有杂带也是挺正常的）。
不知道你的下一步实验是什么，如果是做克隆的话，那就切胶回收，连上载体测序，就知 ...

我的目的片段是1000bp左右，我下步是要胶回收，然后做TA克隆，测序，谢谢给的答案，后续有问题还会像你请教。
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4楼2014-08-20 11:01:18
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