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zj251989

新虫 (小有名气)

[求助] 为何会有如此多的条带??? 已有3人参与

大家好,我最近正在做关于分子上的克隆,但是根据NCBI上设计的引物,因为表达我要蛋白的基因有很多种,然后我就设计了两对引物,老师给的菌没有具体的种属,然后提出基因组,PCR出如图一样的效果,我本身两段目的片段是有1000bp左右,但是看着图我凌乱了,不知道该怎么办?求各位大神给给意见。。。。。。。

为何会有如此多的条带???
2000bp的marke


为何会有如此多的条带???-1
2000bp的marke
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zj251989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shuihaizi at 2014-08-19 16:40:58
个人看法:
图1的第一泳道是有主带的,1000bp左右。你可以适当提高退火温度,这样可能会减少些杂带(PCR有杂带也是挺正常的)。
不知道你的下一步实验是什么,如果是做克隆的话,那就切胶回收,连上载体测序,就知 ...

我的目的片段是1000bp左右,我下步是要胶回收,然后做TA克隆,测序,谢谢给的答案,后续有问题还会像你请教。
4楼2014-08-20 11:01:18
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zj251989: 金币+2, 有帮助 2014-08-20 11:07:03
基因组不知道具体的种属
设计引物是根据什么种属的设计?
这样扩增出来是什么基因都不知道啊  
是老师不知道 还是没说
2楼2014-08-19 16:40:23
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shuihaizi

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zj251989(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-19 20:24:13
zj251989: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-08-20 11:01:29
个人看法:
图1的第一泳道是有主带的,1000bp左右。你可以适当提高退火温度,这样可能会减少些杂带(PCR有杂带也是挺正常的)。
不知道你的下一步实验是什么,如果是做克隆的话,那就切胶回收,连上载体测序,就知道是不是你想要的序列了。
3楼2014-08-19 16:40:58
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zj251989

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shuihaizi at 2014-08-19 16:40:58
个人看法:
图1的第一泳道是有主带的,1000bp左右。你可以适当提高退火温度,这样可能会减少些杂带(PCR有杂带也是挺正常的)。
不知道你的下一步实验是什么,如果是做克隆的话,那就切胶回收,连上载体测序,就知 ...

还有个问题请教一下,我的菌种是分支杆菌NRRLB-3805,但是为什么在NCBI上找不到它的基因组序列?
5楼2014-08-20 11:04:43
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