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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 血浆蛋白沉淀后放置在进样小瓶半小时后仍然产生沉淀
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devil_liu

银虫 (正式写手)

[求助] 血浆蛋白沉淀后放置在进样小瓶半小时后仍然产生沉淀已有6人参与

做药代动力学，前处理用蛋白沉淀，沉淀剂用含1%甲酸的-甲醇/乙腈（1:1）混合液，体积为血浆的3倍。沉淀后涡旋，高速离心，取上清进样，但发现进样小瓶放置半小时后会产生沉淀，达不到进样的要求。如果用甲醇/乙腈（1:1）混合液沉淀，不加甲酸的话（不加甲酸会影响峰形），放置半小时后就不会产生沉淀。
我自己猜想的原因：
1.我的微孔滤膜用的是有机相0.22微米的尼龙66材质，上网查询它遇到100%甲酸会溶解，但我的条件是1%甲酸。有没有耐酸的微孔滤膜？？
特来求助，请高手给予建议。在线等，O(∩_∩)O谢谢
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devil_liu

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1楼2014-08-15 08:41:56
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xiaoniuer

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我试过在加了乙酸的血浆样品中加甲醇沉淀蛋白沉淀不了。还有先加甲醇的话可以很好沉淀，如果在沉淀中再加酸的话沉淀会溶解。这个现象和楼主描述有些相似。
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8楼2015-01-03 19:17:02
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zbgood2009

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
devil_liu: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢 已经另外换方法了 2014-08-18 15:37:37
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-31 19:14:13
很明显你的成分对酸特别敏感。你在看看别的文献有什么改善峰行的办法。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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Doyourbest!
3楼2014-08-16 07:15:40
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
devil_liu: 金币+5, 非常感谢。我已经加大有机溶剂的体积，不过实验室没有配备那么高转速的离心机。。。 2014-08-18 15:36:55
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-31 19:14:20
devil_liu: 金币+5 2014-09-23 17:52:46
这个沉淀很有可能是你的滤膜溶解造成的，可以试着再加大一下有机溶剂的体积（比如4:1或5:1），另外沉淀蛋白后可不过滤膜，高速（20000g以上离心力）离心10-20 min。
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4楼2014-08-16 08:43:05
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renzhichu525

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
devil_liu: 金币+3, ★有帮助, O(∩_∩)O谢谢 2014-08-18 15:37:10
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2014-08-31 19:14:26
离心后直接进样或沉淀蛋白时不加甲酸进样时加入甲酸。
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5楼2014-08-18 10:17:30
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