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用三氯乙酸沉淀后的蛋白质，等电点会发生变化吗 已有1人参与
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| 如题，三氯乙酸沉淀后的蛋白质等电点会发生变化吗 |
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Davidzjy
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八宝粥的(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-01-11 10:40:23
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八宝粥的(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-01-11 10:40:23
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原文标题《三氯乙酸对蛋白质结构稳定性的影响》 摘录： TCA 与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用： ① 在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐； ② 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀； ③ 随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显； ④ 电泳图谱显示，BSA 、HSA 单体谱带有较明显的展宽现象，这可能是由于TCA 的结合，使SDS 与蛋白质的结合量产生偏差，从而造成蛋白质所带电荷的不均一性，造成迁移率的不一致。 我们认为在电泳时使用TCA 对蛋白质样品的浓缩或除盐时，对于分子质量大的蛋白质，要慎重选择TCA。 对小分子量蛋白质的浓缩，采用TCA 时也有两点需要注意：一是用TCA 沉淀后， 尽量用丙酮彻底抽提TCA；二是样品处理后要尽快进行电泳分析，以免发生聚集及断裂， 造成结果分析的不准确。 ———————————————————————————— 摘自《第四军医大学学报》2001; 22 (22) |
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Davidzjy
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Davidzjy
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八宝粥的: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-01-12 09:30:40
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我记得我在学这些东西的时候 老师给我们看得几张图印象深刻 你可以自己google一下 protein surface charge的图片 那些红蓝分别代表正负电荷 再加上conformational change 就会有结构变化导致局部电性变化的示意图了 我这里随便挑了一个 仅供参考 更多的还是要靠你自己 附件是一篇国人发表在nature子刊《结构和分子生物学》上的文章 通过对不同状态下STING蛋白的晶体结构的分析 找到了这类蛋白对cyclic di-GMP的识别和结合方式 文章的意思不需要完全明白 这篇文章的图3b就很好的反映了当蛋白发生构象变化时 局部表面的电性会发生变化 Quote: In addition, the β2-β3–loop conformational rearrangement of monomer A also results in a change in its electrostatic potential surface (Fig. 3b). |
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2014-01-11 22:18:49, 876.62 K
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zhouxj
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