| 查看: 3130 | 回复: 12 | ||
[求助]
面团中自由巯基含量测定
|
||
|
我要测定面团当中的自由巯基含量。用的Ellman方法（蛋白质提取后加入DTNB显色反应，测412nm吸光度）。 这是我的操作。 按照国标方法清洗面筋，然后冷冻干燥，磨粉过筛后制备得到面筋蛋白粉末。 用10ml 8M尿素-Tris/Hcl溶液 溶解0.1g面筋，磁力搅拌1h。 10000g离心10min，取上清液1 ml 加入4ml 8M尿素-Tris/Hcl，100ul 4mg/ml DTNB. 然后就没有颜色反应。 面筋蛋白溶液加巯基乙醇和盐酸胍处理之后，用三氯乙酸沉淀蛋白，结果盐酸胍晶体析出，导致后来不加盐酸胍了（这个问题又是闹哪样！）。沉淀后的蛋白质用8M尿素溶解加DTNB有颜色反应，说明方法没问题，二硫键也存在的好好地。 问题出在哪里呢？我用半胱氨酸溶液和DTNB反应，有颜色反应，说明DTNB没问题。自由巯基容易被氧化，是在制备面筋蛋白的过程中被氧化了？还是有其他什么原因呢。我看很多中文文章都测过，很容易的样子，可是我一直没搞定。 |
回复此楼» 猜你喜欢
273农学求调剂
已经有0人回复
-
一志愿上海海洋大学083200,303分求调剂
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有243人回复
-
食品科学调剂交流
已经有0人回复
-
食品学硕362求调剂
已经有3人回复
-
一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业
已经有7人回复
-
食品调剂08考数学可调
已经有0人回复
-
食品工程调剂
已经有2人回复
-
09，食品与营养272求调剂
已经有0人回复
-
一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业083200
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助大神，结合蛋白质理论，论述面包制作过程所利用蛋白质的性质。。
已经有3人回复
- 蛋白中巯基和二硫键的测定
已经有13人回复
- 盐酸胍含量检测
已经有10人回复
- 蛋白质巯基的测定问题
已经有14人回复
- 用三氯乙酸沉淀后的蛋白质，等电点会发生变化吗
已经有7人回复
- 流变仪能不能测面团
已经有10人回复
- 面团方面的问题
已经有6人回复
- 半胱氨酸上的巯基氧化
已经有9人回复
- 测定自由基含量
已经有5人回复
- 巯基与羟基的自由基加成反应活性
已经有4人回复
- 自由基检测的显色试剂
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于含巯基多肽
已经有6人回复
煜，莫烦恼
木虫 (著名写手)
虫蛹
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 13489.7
- 散金: 22
- 红花: 7
- 帖子: 1133
- 在线: 267小时
- 虫号: 966097
- 注册: 2010-03-09
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
4楼2013-06-29 21:52:56
煜，莫烦恼
木虫 (著名写手)
虫蛹
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 13489.7
- 散金: 22
- 红花: 7
- 帖子: 1133
- 在线: 267小时
- 虫号: 966097
- 注册: 2010-03-09
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
2楼2013-06-28 20:46:38
3楼2013-06-29 19:28:32
5楼2013-07-02 10:23:53
6楼2015-04-09 10:53:31
1012203014
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 334.1
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 395
- 在线: 232.6小时
- 虫号: 1349300
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 化学反应工程
|
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 |
7楼2015-09-29 09:06:59
1012203014
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 334.1
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 395
- 在线: 232.6小时
- 虫号: 1349300
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 化学反应工程
|
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 |
8楼2015-09-29 09:07:14
1012203014
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 334.1
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 395
- 在线: 232.6小时
- 虫号: 1349300
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 化学反应工程
|
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 |
9楼2015-09-29 09:07:42
1012203014
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 334.1
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 395
- 在线: 232.6小时
- 虫号: 1349300
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 化学反应工程
|
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 |
10楼2015-09-29 09:17:40
