应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 面团中自由巯基含量测定
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3110  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

loveiron

新虫 (初入文坛)

[求助] 面团中自由巯基含量测定

我要测定面团当中的自由巯基含量。用的Ellman方法（蛋白质提取后加入DTNB显色反应，测412nm吸光度）。
这是我的操作。
按照国标方法清洗面筋，然后冷冻干燥，磨粉过筛后制备得到面筋蛋白粉末。
用10ml  8M尿素-Tris/Hcl溶液 溶解0.1g面筋，磁力搅拌1h。
10000g离心10min，取上清液1 ml 加入4ml 8M尿素-Tris/Hcl，100ul 4mg/ml DTNB.
然后就没有颜色反应。
面筋蛋白溶液加巯基乙醇和盐酸胍处理之后，用三氯乙酸沉淀蛋白，结果盐酸胍晶体析出，导致后来不加盐酸胍了（这个问题又是闹哪样！）。沉淀后的蛋白质用8M尿素溶解加DTNB有颜色反应，说明方法没问题，二硫键也存在的好好地。

问题出在哪里呢？我用半胱氨酸溶液和DTNB反应，有颜色反应，说明DTNB没问题。自由巯基容易被氧化，是在制备面筋蛋白的过程中被氧化了？还是有其他什么原因呢。我看很多中文文章都测过，很容易的样子，可是我一直没搞定。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-28 17:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujoffe

新虫 (初入文坛)
楼主 你的问题解决了嘛？我也想咨询下你如何做的面粉巯基含量的测定
赞一下 回复此楼
6楼2015-04-09 10:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
处理液Tris/HCl pH问题，显色液可能要用Tris/Gly-SDS-Urea ,另外Ellman试剂也使用Tris/Gly 配，显色时间、水浴温度等，你都没提到？
赞一下 回复此楼
努力努力，奋斗奋斗！
2楼2013-06-28 20:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveiron

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 煜，莫烦恼 at 2013-06-28 20:46:38
处理液Tris/HCl pH问题，显色液可能要用Tris/Gly-SDS-Urea ,另外Ellman试剂也使用Tris/Gly 配，显色时间、水浴温度等，你都没提到？

tris/Hcl （1L里溶解20.4gtris，6.9gglycine，1.2gEDTA） pH 8.0，ellman以及其他试剂都用的这个tris/Hcl 配置的。
显色液我用的8M尿素溶液（溶解在tris/hcl ，没有SDS）。
显色5min。（发现没颜色，一直放着，也都没颜色）
没有水浴，室温放置的。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-29 19:28:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by loveiron at 2013-06-29 19:28:32
tris/Hcl （1L里溶解20.4gtris，6.9gglycine，1.2gEDTA） pH 8.0，ellman以及其他试剂都用的这个tris/Hcl 配置的。
显色液我用的8M尿素溶液（溶解在tris/hcl ，没有SDS）。
显色5min。（发现没颜色，一直放着，也 ...

你是参考国标的么？ Ellman试剂不用tris/HCl 配，应该用tris/gly 配。而针对面筋蛋白的处理液（一般是tris-gly-edta-urea 之类的）最好参考权威文献。另外，若是测蛋白中总巯基一般需要40℃水浴15min-25min充分显色。  最关键我觉得是你离心后上清液中水溶蛋白到底有没有；若有，巯基有没有充分暴露而与DTNB反应。 楼主再好好看看参考文献，理清溶液配置的一些细节，重点看看面筋蛋白相关密切的内容。
赞一下(1人) 回复此楼
努力努力，奋斗奋斗！
4楼2013-06-29 21:52:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +10 辰沐5211314 2026-03-26 10/500 2026-03-29 21:01 by 唐沐儿
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +11 nnnnnnn5 2026-03-25 11/550 2026-03-29 20:42 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +9 张zz111 2026-03-27 10/500 2026-03-29 14:57 by 唐沐儿
[考研] 一志愿：西北大学，英一数一408-284分求调剂 +4 12.27 2026-03-27 4/200 2026-03-29 14:40 by zhshch
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 289求调剂 +13 新时代材料 2026-03-27 13/650 2026-03-29 01:16 by 544594351
[考研] 332求调剂 +4 @MZB382400 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:02 by 唐沐儿
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 311求调剂 +9 lin0039 2026-03-26 9/450 2026-03-28 13:05 by 唐沐儿
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 考研调剂 +4 Sanmu-124 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:49 by kiokin
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭