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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 水产品、畜产品 » 蛋白质巯基的测定问题
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bw2318

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质巯基的测定问题 已有4人参与

有人做过巯基测定吗？有个缓冲液不知道怎么配置，求高手指点。
（50mmol/L磷酸盐缓冲液，pH7. 0     10mmol/L EDTA   0.6mol/L KCl    8mol/L 尿素）。。。以上就是缓冲液中的试剂，请问这个应该怎么配置，用蒸馏水还是用磷酸盐缓冲液配置，各试剂的量怎么加？  求高手指点
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1楼 2014-05-14 18:46:07
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掺水的葡萄酒

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就是50mmol/L磷酸盐缓冲液，pH7. 0这个体系中含有10mmol/L EDTA   0.6mol/L KCl    8mol/L 尿素，各试剂的量按你所要的溶液体积换算成质量，称好加进去~
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2楼2014-05-14 19:01:03
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bw2318

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 掺水的葡萄酒 at 2014-05-14 19:01:03
就是50mmol/L磷酸盐缓冲液，pH7. 0这个体系中含有10mmol/L EDTA   0.6mol/L KCl    8mol/L 尿素，各试剂的量按你所要的溶液体积换算成质量，称好加进去~

谢谢你的回复。如果按1L的量配置，几乎要加一瓶尿素，还加edta和kcl等。。是这样吗？

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3楼2014-05-14 19:21:14
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，我每次都要用一瓶尿素，而且还不好溶解，要超声，在用水浴锅，加加热~~~~~祝你成功~~~
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bw2318
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4楼2014-05-14 21:36:43
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bw2318

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-05-14 21:36:43
是的，我每次都要用一瓶尿素，而且还不好溶解，要超声，在用水浴锅，加加热~~~~~祝你成功~~~

真是太谢谢你了，又帮我解决一次问题。其实还有点问题，你有时间再回复我吧，呵呵。
1.我提取出来的是肌原纤维蛋白残渣（沉淀），然后用双缩脲法测定蛋白的浓度，但需要配置成溶液才能测得样品的肌原纤维蛋白浓度，所以我在想蛋白溶液浓度怎么配？
2.你测过蛋白质羰基含量吗？有计算公式没？


麻烦你了哈 前辈。
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5楼2014-05-14 22:49:35
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by bw2318 at 2014-05-14 22:49:35
真是太谢谢你了，又帮我解决一次问题。其实还有点问题，你有时间再回复我吧，呵呵。
1.我提取出来的是肌原纤维蛋白残渣（沉淀），然后用双缩脲法测定蛋白的浓度，但需要配置成溶液才能测得样品的肌原纤维蛋白浓度 ...

1.配一个10mg/ml、直接测就可以了，估计在这个浓度下有很多不溶的```
2、没有测过，你可以找些文献参考
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6楼2014-05-15 09:36:18
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bw2318

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 答非所问 at 2014-05-15 09:36:18
1.配一个10mg/ml、直接测就可以了，估计在这个浓度下有很多不溶的```
2、没有测过，你可以找些文献参考...

按10mg/mL配的话，测得的实际浓度肯定是低于10mg/mL，比如实际测得浓度是9.2mg/mL，那我后面要配4mg/mL，那需要多少g的肌原纤维蛋白。。我就是这个问题没搞清楚。

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7楼2014-05-15 10:46:34
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bacherer

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上基本差不多了，帮你顶了。
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8楼2014-05-15 18:52:42
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答非所问

荣誉版主 (职业作家)

ET.....

优秀版主
引用回帖:
7楼: Originally posted by bw2318 at 2014-05-15 10:46:34
按10mg/mL配的话，测得的实际浓度肯定是低于10mg/mL，比如实际测得浓度是9.2mg/mL，那我后面要配4mg/mL，那需要多少g的肌原纤维蛋白。。我就是这个问题没搞清楚。
...

溶解以后再用体积稀释~不用再称取了
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9楼2014-05-15 22:45:00
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掺水的葡萄酒

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

基本回复的差不多了，基本解决了，羰基含量没测过，帮不到了，你可以查查文献，那个肌原纤维蛋白浓度按你实际测得的蛋白浓度稀释到你所要的浓度就OK了~~
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10楼2014-05-16 14:47:47
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