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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)

[求助] 蛋白质修饰过程中如何避免蛋白质失活的问题？

最近要做一个NHS/DCC活性酯与抗体上氨基的反应，怎么样才能避免活性酯与抗体上重要区域的氨基反应，通过控制投料比实现吗，如何摸索条件？
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QQ2413093642
1楼 2012-10-30 08:51:51
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红舟流星

荣誉版主 (文坛精英)

志在成为千元户！

优秀版主优秀版主优秀版主
★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2012-11-05 20:48:48
没做过，个人想法：能否利用位阻效应
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红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
2楼2012-10-30 10:20:19
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ruinyan

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2012-11-05 20:49:04
没做过抗体，但是做过某些蛋白质的改性。裸露的lys上的氨基的反应活性最强，先确定好你的目标氨基。抗体重要区域的氨基是否裸露？活性是否很强？如果活性相当的话控制投料比可以保证一部分抗体保持活性，但是可能夹杂失活的~另外，有没有其它可反应基团，如羧基、巯基~
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3楼2012-10-30 11:10:15
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红舟流星 at 2012-10-30 10:20:19
没做过，个人想法：能否利用位阻效应

谢谢
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QQ2413093642
4楼2012-10-30 11:22:19
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ruinyan at 2012-10-30 11:10:15
没做过抗体，但是做过某些蛋白质的改性。裸露的lys上的氨基的反应活性最强，先确定好你的目标氨基。抗体重要区域的氨基是否裸露？活性是否很强？如果活性相当的话控制投料比可以保证一部分抗体保持活性，但是可能夹 ...

嗯，谢谢
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QQ2413093642
5楼2012-10-30 11:23:50
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ruinyan at 2012-10-30 11:10:15
没做过抗体，但是做过某些蛋白质的改性。裸露的lys上的氨基的反应活性最强，先确定好你的目标氨基。抗体重要区域的氨基是否裸露？活性是否很强？如果活性相当的话控制投料比可以保证一部分抗体保持活性，但是可能夹 ...

你好，请问如何查看抗体重要区域的氨基是否裸露？或者你们在做蛋白质的改性时是如何确定的？
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QQ2413093642
6楼2012-11-05 16:01:06
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
在抗体改性中，我看很多人都是直接采用EDC/NHS活性酯的方法，难道这个方法很安全？
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QQ2413093642
7楼2012-11-05 16:02:35
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ruinyan

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
markar: 金币+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！ 2012-11-05 20:49:27
红舟流星: 金币+7, 代扣代发金币 2013-02-26 08:00:18
引用回帖:
6楼: Originally posted by 0602120131 at 2012-11-05 16:01:06
你好，请问如何查看抗体重要区域的氨基是否裸露？或者你们在做蛋白质的改性时是如何确定的？...

一般是通过查文献获得的，查阅这种蛋白或多肽改性的文献以及表征其一级二级以及空间结构的文献~如果没有的话，改性后测试一下其空间结构有没有改变，有没有失活也是可以的~
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0602120131
8楼2012-11-05 16:31:38
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by ruinyan at 2012-11-05 16:31:38
一般是通过查文献获得的，查阅这种蛋白或多肽改性的文献以及表征其一级二级以及空间结构的文献~如果没有的话，改性后测试一下其空间结构有没有改变，有没有失活也是可以的~...

谢谢
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QQ2413093642
9楼2012-11-05 20:18:06
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料版块应助交流 2012-11-06 13:55:27
红舟流星: 金币+3, 代扣代发金币 2013-02-26 08:00:09
首先声明：本人未做过蛋白质修饰
不过从做化学的角度看，有以下两种手段：
1、首先利用底物类似物和蛋白结合，占住活性位点，然后再修饰蛋白，修饰后去除底物，保证活性中心不受影响。
2、更换反应方案，一般情况下蛋白中的半胱氨酸大多不是活性位点，采用巯基修饰可能更好些。
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
10楼2012-11-05 21:21:20
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