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qlw4567铁杆木虫 (著名写手)
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关于蛋白质多聚体检测问题。
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| 如题，我现在做牛血清蛋白的分离试验，但是在不同浓度下我认为它含有不同量的多聚体蛋白质，有什么办法能测出BSA溶液里面多聚体的含量，或者BSA单体的含量也行。 |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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【答案】应助回帖
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qlw4567: 金币+50, ★★★很有帮助, 谢谢您的帮助，虽然还有些疑问，但是金币给您了。 2013-05-12 10:36:37
qlw4567: 金币+50, ★★★很有帮助, 谢谢您的帮助，虽然还有些疑问，但是金币给您了。 2013-05-12 10:36:37
| 是,你可以通过粒径分布确定聚合体分布情况, 关于分子筛堵柱子是有这样的风险，主要还是看你所谓的聚集是多大的粒径了，如果小的话分子筛应该没有问题。DSL好像不太存在这样的堵塞柱子的问题。我突然想到还有一种粗糙的办法就是走非变性胶（native-PAGE）,但是这种方法有时候不是很可信，还是前两种方法比较靠谱。 |
6楼2013-05-12 07:14:05
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现用非变性的分子筛层析或者非变性凝胶电泳测定一下可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的相对分子量，非变性凝胶电泳可以测定蛋白质的相对分子量，但有时不太准，因为还与蛋白质的空间构象有关系。因为分子筛层析或者凝胶电泳测定一下可能的BSA（牛血清白蛋白的聚合体的相对分子量）多少都是BSA大致呈现倍数关系。所以可以测定出来。至于有人说：分子筛层析上样聚合体会堵住层析柱，这是可能的，不过上样前应该过滤除去不溶物，不然不仅分子筛层析会堵，非变性凝胶电泳照样也走不动。这样可以按测出来BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的相对分子量。要知道BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的在溶液中的含量，那么只要在非变性条件下，把可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合体按照不同聚合程度的相对分子量分离出来，然后用福林酚方法、紫外吸收法可以通过光谱检测出来溶液中的蛋白质的含量，另外也可以从层析柱的色谱峰的面积读出蛋白质的含量（有专门的积分仪器和软件）。 具体可以参考： 1.吕宪禹 主编，蛋白质纯化实验方案与应用，化学工业出版社，2010， http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126 2.汪正范 编著，色谱定性与定量，化学工业出版社，2000. http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6427417 |
7楼2014-08-24 16:38:49
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