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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白质多聚体检测问题。
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 关于蛋白质多聚体检测问题。

如题，我现在做牛血清蛋白的分离试验，但是在不同浓度下我认为它含有不同量的多聚体蛋白质，有什么办法能测出BSA溶液里面多聚体的含量，或者BSA单体的含量也行。
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努力和媳妇一起上完博士
1楼2013-05-08 14:53:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
现用非变性的分子筛层析或者非变性凝胶电泳测定一下可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的相对分子量，非变性凝胶电泳可以测定蛋白质的相对分子量，但有时不太准，因为还与蛋白质的空间构象有关系。因为分子筛层析或者凝胶电泳测定一下可能的BSA（牛血清白蛋白的聚合体的相对分子量）多少都是BSA大致呈现倍数关系。所以可以测定出来。至于有人说：分子筛层析上样聚合体会堵住层析柱，这是可能的，不过上样前应该过滤除去不溶物，不然不仅分子筛层析会堵，非变性凝胶电泳照样也走不动。这样可以按测出来BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的相对分子量。要知道BSA（牛血清白蛋白）的聚合体的在溶液中的含量，那么只要在非变性条件下，把可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合体按照不同聚合程度的相对分子量分离出来，然后用福林酚方法、紫外吸收法可以通过光谱检测出来溶液中的蛋白质的含量，另外也可以从层析柱的色谱峰的面积读出蛋白质的含量（有专门的积分仪器和软件）。
具体可以参考：
1.吕宪禹 主编，蛋白质纯化实验方案与应用，化学工业出版社，2010，
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126
2.汪正范  编著，色谱定性与定量，化学工业出版社，2000.
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6427417
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7楼2014-08-24 16:38:49
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)
自己帮顶，就没有生物学的大神们帮忙看下么~~~~
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努力和媳妇一起上完博士
2楼2013-05-10 09:20:19
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, thanks for sharing the experience 2013-05-11 00:07:02
我知道的方法就是使用分子筛的，如果聚合的很好的话！走分子筛你会看到多个峰对应不同的分子量。此外，激光动态散色也可以间接检测分子粒径的分布从而判断其聚合度和分布。
希望对你有用。
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3楼2013-05-10 11:17:17
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qlw4567

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-10 11:17:17
我知道的方法就是使用分子筛的，如果聚合的很好的话！走分子筛你会看到多个峰对应不同的分子量。此外，激光动态散色也可以间接检测分子粒径的分布从而判断其聚合度和分布。
希望对你有用。

您能详细说明下，走分子筛是什么意思？让蛋白质溶液放入分子筛？然后再用什么东西测试？
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努力和媳妇一起上完博士
4楼2013-05-10 15:23:05
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