应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 面团中自由巯基含量测定
132/2返回列表上一页12
查看: 2984  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

1012203014

金虫 (正式写手)
99503102: 由于本贴时间较为久远，建议另开求助帖求助 2015-10-07 20:55:31
测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
谢谢了
赞一下 回复此楼
奋斗！永不止步！
11楼2015-10-07 15:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 煜，莫烦恼 at 2013-06-28 20:46:38
处理液Tris/HCl pH问题，显色液可能要用Tris/Gly-SDS-Urea ,另外Ellman试剂也使用Tris/Gly 配，显色时间、水浴温度等，你都没提到？

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
谢谢了
赞一下 回复此楼
奋斗！永不止步！
12楼2015-10-07 15:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by loveiron at 2013-07-02 10:23:53
没有测巯基的国标吧？至少没找到。
我看中文用ellman方法的全部是这么做的（然后就假设中文没那么可信）
参考外文，《determination of SH- and SS-group in some food proteins using ellman's reagent》. 我也 ...

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更方法

谢谢了
赞一下 回复此楼
奋斗！永不止步！
13楼2015-10-07 15:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveiron 的主题更新
132/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭