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八宝粥的

木虫 (小有名气)

[求助] 用三氯乙酸沉淀后的蛋白质,等电点会发生变化吗 已有1人参与

如题,三氯乙酸沉淀后的蛋白质等电点会发生变化吗
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
八宝粥的(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2014-01-11 10:40:23
原文标题《三氯乙酸对蛋白质结构稳定性的影响》
摘录:
TCA 与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:
① 在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐;
② 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀;
③ 随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显;
④ 电泳图谱显示,BSA 、HSA 单体谱带有较明显的展宽现象,这可能是由于TCA 的结合,使SDS 与蛋白质的结合量产生偏差,从而造成蛋白质所带电荷的不均一性,造成迁移率的不一致。
我们认为在电泳时使用TCA 对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA。
对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA 时也有两点需要注意:一是用TCA 沉淀后, 尽量用丙酮彻底抽提TCA;二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂, 造成结果分析的不准确。
————————————————————————————
摘自《第四军医大学学报》2001; 22 (22)
2楼2014-01-11 09:12:42
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八宝粥的

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Davidzjy at 2014-01-11 09:12:42
原文标题《三氯乙酸对蛋白质结构稳定性的影响》
摘录:
TCA 与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:
① 在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐;
② 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基 ...

这个我看到了,但变性貌似不会影响蛋白质的一级结构,即它的碱性、酸性氨基酸的数目还是一定的吧,这样它的等电点是不是不会变啊
3楼2014-01-11 13:05:59
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-11 16:17:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 八宝粥的 at 2014-01-11 13:05:59
这个我看到了,但变性貌似不会影响蛋白质的一级结构,即它的碱性、酸性氨基酸的数目还是一定的吧,这样它的等电点是不是不会变啊...

PI可不是由以及结构决定的
是根据蛋白质的折叠方式决定
因为在蛋白质结构内部的基团与水中各种例子接触的机会很小
PI的高低更多的是由蛋白质表面残基的性质决定
上面引文的第二条提到 TCA的结合会使蛋白质构象发生变化
那么 自然蛋白质的PI也会随之改变
4楼2014-01-11 15:05:16
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八宝粥的

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Davidzjy at 2014-01-11 15:05:16
PI可不是由以及结构决定的
是根据蛋白质的折叠方式决定
因为在蛋白质结构内部的基团与水中各种例子接触的机会很小
PI的高低更多的是由蛋白质表面残基的性质决定
上面引文的第二条提到 TCA的结合会使蛋白质构象 ...

谢谢,因为我不是做这方面的,不知道您是否有您所说观点的英文文献呢
5楼2014-01-11 15:09:59
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
八宝粥的: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-01-12 09:30:40
引用回帖:
5楼: Originally posted by 八宝粥的 at 2014-01-11 15:09:59
谢谢,因为我不是做这方面的,不知道您是否有您所说观点的英文文献呢...

我记得我在学这些东西的时候 老师给我们看得几张图印象深刻
你可以自己google一下 protein surface charge的图片
那些红蓝分别代表正负电荷
再加上conformational change 就会有结构变化导致局部电性变化的示意图了
我这里随便挑了一个
仅供参考 更多的还是要靠你自己
附件是一篇国人发表在nature子刊《结构和分子生物学》上的文章
通过对不同状态下STING蛋白的晶体结构的分析 找到了这类蛋白对cyclic di-GMP的识别和结合方式
文章的意思不需要完全明白
这篇文章的图3b就很好的反映了当蛋白发生构象变化时 局部表面的电性会发生变化
Quote: In addition, the β2-β3–loop conformational rearrangement of monomer A also results in a change in its electrostatic potential surface (Fig. 3b).

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  • 附件 1 : 77509332.pdf
  • 2014-01-11 22:18:49, 876.62 K
6楼2014-01-11 22:20:36
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八宝粥的

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Davidzjy at 2014-01-11 22:20:36
我记得我在学这些东西的时候 老师给我们看得几张图印象深刻
你可以自己google一下 protein surface charge的图片
那些红蓝分别代表正负电荷
再加上conformational change 就会有结构变化导致局部电性变化的示意 ...

好的,真的是谢谢你了
7楼2014-01-12 09:30:57
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

谢谢了
8楼2014-01-12 09:55:05
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