应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急
51/1返回列表
查看: 1534  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

aprils1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急

提取肝癌组织蛋白以后，不知道为什么都会在煮了5分钟以后管底出现白色的半凝固的沉淀，然后把PCR管倒过来这些凝固也不会流下来，用手弹一下倒是会下来

我用的是200ul的pcrG管装（是不是太小了），，蛋白已离心留上清，装80ul蛋白提取液和20ul的5*SDS上样缓冲液（碧云天），用水煮到沸腾，5min。

还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-18 20:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-19 18:27:55
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-19 15:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-19 15:44:39
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。

“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下就形成沉淀，至少我在实验中这种浓度的蛋白质还没有出现过加热生成沉淀的情况；请问你在western blot实验中发现过这种浓度的蛋白质受热沉淀吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-20 03:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右” 正常情况下，这个浓度加热是不会引起沉淀的。

如果可以建议你换个 上样缓冲液 试试~

good luck
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-20 03:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zugur at 2013-08-19 20:08:20
“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下 ...

我经常看到这个现象。不影响你western的结果。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
5楼2013-08-20 04:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aprils1988 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 材料专硕326求调剂 +4 墨煜姒莘 2026-03-15 4/200 2026-03-15 11:02 by dyw
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭