应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急
51/1返回列表
查看: 1536  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

aprils1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急

提取肝癌组织蛋白以后，不知道为什么都会在煮了5分钟以后管底出现白色的半凝固的沉淀，然后把PCR管倒过来这些凝固也不会流下来，用手弹一下倒是会下来

我用的是200ul的pcrG管装（是不是太小了），，蛋白已离心留上清，装80ul蛋白提取液和20ul的5*SDS上样缓冲液（碧云天），用水煮到沸腾，5min。

还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-18 20:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-19 18:27:55
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-19 15:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-19 15:44:39
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。

“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下就形成沉淀，至少我在实验中这种浓度的蛋白质还没有出现过加热生成沉淀的情况；请问你在western blot实验中发现过这种浓度的蛋白质受热沉淀吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-20 03:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右” 正常情况下，这个浓度加热是不会引起沉淀的。

如果可以建议你换个 上样缓冲液 试试~

good luck
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-20 03:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zugur at 2013-08-19 20:08:20
“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下 ...

我经常看到这个现象。不影响你western的结果。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
5楼2013-08-20 04:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aprils1988 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭