应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急
51/1返回列表
查看: 1836  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

aprils1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于组织蛋白变性后的半凝固沉淀！！急

提取肝癌组织蛋白以后，不知道为什么都会在煮了5分钟以后管底出现白色的半凝固的沉淀，然后把PCR管倒过来这些凝固也不会流下来，用手弹一下倒是会下来

我用的是200ul的pcrG管装（是不是太小了），，蛋白已离心留上清，装80ul蛋白提取液和20ul的5*SDS上样缓冲液（碧云天），用水煮到沸腾，5min。

还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-18 20:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-08-19 18:27:55
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-19 15:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-19 15:44:39
蛋白变形沉淀是很正常的事情啊。说明蛋白浓度很好。直接上样就行了。

“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下就形成沉淀，至少我在实验中这种浓度的蛋白质还没有出现过加热生成沉淀的情况；请问你在western blot实验中发现过这种浓度的蛋白质受热沉淀吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-20 03:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zugur

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“还是因为蛋白浓度太高？？用BCA测定浓度在10ug/ul左右” 正常情况下，这个浓度加热是不会引起沉淀的。

如果可以建议你换个 上样缓冲液 试试~

good luck
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-20 03:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by zugur at 2013-08-19 20:08:20
“蛋白变形沉淀是很正常的事情啊” 做western blot变形后沉淀依然可以用来上样吗？这样会不会影响跑胶。因为我从来没有碰到过这种情况，学习下~
10ug/ul的蛋白质浓度对做western blot来说不算太高，还不至于加热下 ...

我经常看到这个现象。不影响你western的结果。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
5楼2013-08-20 04:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aprils1988 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-10-31 23:23 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 7/350 2026-10-31 23:18 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-10-31 23:17 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 5/250 2026-10-31 23:10 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 23:10 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-10-31 22:52 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 14/700 2026-10-31 22:46 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 19/950 2026-10-31 22:44 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 24/1200 2026-10-31 22:39 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 21:54 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-10-31 21:51 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-10-31 21:41 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 9/450 2026-10-31 21:34 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-10-31 21:25 by YXM1FDCSE8Bn
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 13/650 2026-10-31 17:12 by hKe7U1kad5Sg
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-10-31 17:05 by hKe7U1kad5Sg
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
[考博] 申博求助 20+3 Katrinae 2026-10-26 4/200 2026-10-27 09:56 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭