| 查看: 1073 | 回复: 3 | |||
foodwl银虫 (初入文坛)
|
[交流]
关于定量PCR做基因表达量的疑问 已有2人参与
|
|
作为刚开始接触分子生物学的小白来说，实在是有太多的不懂，所用言语存在的不适当之处，还请大家多多批评指正。 表示一直对定量PCR的原理都看的不是太明白，不知道该怎么定一个相同的初始量来比较最终实时定量PCR的结果。 实验想要的是样品在不同贮藏时间中，某些基因得到表达量的变化。请教他人得来的最初方法是在提取总RNA之后，稀释全部样品的RNA浓度到统一的值，然后做反转录之后再将得到的所有样品的cDNA的浓度调整到一致，然后做半定量PCR之后得到合适的引物，就可以做定量PCR了 今天又听说，在半定量PCR的时候还要调整全部样品cDNA的量，使得所有样品在P内参基因后电泳的条带亮度一致，然后再用这个的量来进行定量PCR，这样再调整的话，岂不是之前的量就不一致了么？？？ 因为本是小白，是在是越来越晕，是有步骤重复了，还是怎样，到底该如何保证定量PCR之前样品量的一致性问题呢？ 实时定量的时候还是每个样品都要做一个内参么？ 求各位大侠相助，不胜感激  |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有63人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR中，结果内参基因的CT值有，但是目的基因的CT值没有，怎么办
已经有20人回复
- 做基因表达采用荧光定量PCR的步骤
已经有3人回复
- 绝对定量PCR中标准品的疑问？
已经有9人回复
- 荧光定量PCR数据处理——SD值及方差分析
已经有5人回复
- 反转录的cDNA没问题，但是实时定量PCR却不行。内参扩不出来啊。
已经有8人回复
- real-time PCR 相对定量时 找不到内参基因 是不是就没法做？
已经有4人回复
- 做荧光定量PCR,如果对照组的目的基因不表达,在采用2-△△Ct时怎么处理数据
已经有6人回复
- 荧光定量PCR的相对定量怎么用？
已经有5人回复
- 怎么做实时定量pcr？
已经有7人回复
- 关于荧光定量PCR基因扩增的问题
已经有5人回复
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- 实时荧光定量 相同基因不同处理条件下的相对定量
已经有4人回复
- 相对定量内参基因循环数的问题
已经有18人回复
- Realtime PCR 内参与目的基因问题
已经有11人回复
- 请教PCR高手，使用SYBR Green I法进行荧光定量PCR对于产物大小有什么要求？
已经有21人回复
- 荧光定量PCR的模板浓度
已经有12人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 两个基因序列能不能做荧光定量PCR？请教大家一下！！！
已经有4人回复
- 荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀?
已经有31人回复
- 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
已经有8人回复
owl2010
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2619.7
- 散金: 608
- 红花: 24
- 帖子: 433
- 在线: 700.1小时
- 虫号: 1338696
- 注册: 2011-07-06
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:33:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:33:07
|
半定量是这样操作的，反转录相同的RNA用量（如1ugRNA），用actin引物去扩增每个样本，虽然反转录用的是相同的RNA量，但是actin扩增出来的片段还是会有亮度差异的问题，这时就得根据不同的亮度调整每个模板的用量，待actin扩增的片段亮度调成大体一致后，每个模板的用量也会不尽相同，然后用基因的引物在每个模板里扩增，每个模板的用量和调好actin的模板用量一致，这样就会得到基因的表达量的差异。 定量PCR可以不调模板浓度，因为每个模板都要做内参，通过计算每个模板的内参来计算每个模板基因的表达量。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
foodwl
2楼2014-08-17 18:55:42
3楼2014-08-18 09:53:26
foodwl
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 344.9
- 散金: 86
- 帖子: 20
- 在线: 5.1小时
- 虫号: 2218281
- 注册: 2013-01-02
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
4楼2014-09-09 10:53:12
