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荧光定量PCR数据处理——SD值及方差分析 已有1人参与
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荧光定量PCR的数据 我的实验中有五种处理方法，每种方法三个生物学重复，每个生物学重复又在做荧光定量的时候做了三组复孔 1.三个重复处理顺序问题： 在做数据处理的时候应该是将三个生物学重复的内参CT做平均，目的基因CT做平均，然后整体做ΔCT 和SD，再做ΔΔCT 还是应该每个生物学重复先自己做ΔCT，得到三个ΔCT以后，再做平均，求三个ΔCT的SD值？这两种算法SD值不太相同。。 2.另外我的三个生物学重复之间重复性不好，处理明明是一样的，都在一个盆子里种的，这样应该怎么分析，应该剔除么？SD值很大很大。。如果不剔除发文章应该如何分析，能过么？ 3.方差分析应该如何做？虽然做了三个生物学重复，可每种处理的ΔΔCT不是只有一个么，那2^(-ΔΔCT)只有一个怎么判断五种处理的差异显著性呢？ 4.之前曾经做了另一个实验，是两种处理方法，11个不同品种，做荧光定量，因为样品很多，采用了混样法，就是只做了三次技术重复，并未做生物学重复，用实验组和对照组相对表达量2倍以上的算作了显著，这样如果发文章的话，能过么？老师让发plos one |
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【答案】应助回帖
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monazhou001: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-24 13:03:48
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..... 1. 内参的变动理应该变动不大，正确的算法是Sample减去平均后的内参，会得到三个deltaCT，这个自然有自己的SD 2. 生物学重复的误差大就是实验设计问题，或者没有注意到细节，包括光照差异，处理时间等等。你可以剔除一个大离群值，做两个生物学重复也是可以的（我个人认为........） 3. 统计学不是这么用的，我个人认为，你要用ANOVA就必须上重复实验，而不是拿生物学重复之间做比较，这是概念混淆。 4. 我毫不客气地说：个人认为你这种做法纯粹是糊弄人，什么叫只做技术重复，技术重复能说明什么生物学问题？这只是看操作误差。你靠这种方式把SD Bar拉小，然后说明处理、样品间有差异，木有任何意义。 个人看法，如有说错请高手指点。 |
2楼2014-03-14 22:23:43
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