| 查看: 12524 | 回复: 5 | |||
[求助]
荧光定量PCR数据处理——SD值及方差分析 已有1人参与
|
|
荧光定量PCR的数据 我的实验中有五种处理方法，每种方法三个生物学重复，每个生物学重复又在做荧光定量的时候做了三组复孔 1.三个重复处理顺序问题： 在做数据处理的时候应该是将三个生物学重复的内参CT做平均，目的基因CT做平均，然后整体做ΔCT 和SD，再做ΔΔCT 还是应该每个生物学重复先自己做ΔCT，得到三个ΔCT以后，再做平均，求三个ΔCT的SD值？这两种算法SD值不太相同。。 2.另外我的三个生物学重复之间重复性不好，处理明明是一样的，都在一个盆子里种的，这样应该怎么分析，应该剔除么？SD值很大很大。。如果不剔除发文章应该如何分析，能过么？ 3.方差分析应该如何做？虽然做了三个生物学重复，可每种处理的ΔΔCT不是只有一个么，那2^(-ΔΔCT)只有一个怎么判断五种处理的差异显著性呢？ 4.之前曾经做了另一个实验，是两种处理方法，11个不同品种，做荧光定量，因为样品很多，采用了混样法，就是只做了三次技术重复，并未做生物学重复，用实验组和对照组相对表达量2倍以上的算作了显著，这样如果发文章的话，能过么？老师让发plos one |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于荧光定量PCR的数据分析
已经有8人回复
- 做荧光定量PCR,如果对照组的目的基因不表达,在采用2-△△Ct时怎么处理数据
已经有6人回复
- 荧光定量PCR cq非数字是什么原因
已经有6人回复
- 相对荧光定量PCR
已经有11人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR
已经有12人回复
- 求助荧光定量PCR统计方法
已经有7人回复
- 荧光定量PCR数据分析
已经有413人回复
- 荧光定量PCR结果如何处理
已经有12人回复
- ABI7500荧光定量PCR内部培训资料合集
已经有13人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 荧光定量PCR实验技术
已经有15人回复
- 求解：实时荧光定量PCR奇峰
已经有18人回复
- 相对定量荧光PCR结果分析中的SD如何计算？
已经有7人回复
- 合适的荧光定量PCR管
已经有11人回复
- 定量PCR读取荧光值的步骤需要保持多长时间？
已经有12人回复
- 荧光定量PCR标准曲线的建立
已经有3人回复
- 荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀?
已经有31人回复
- 【求助/交流】RT-PCR的数据处理
已经有14人回复
- 求助交流 荧光定量PCR基线偏下
已经有5人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr
已经有11人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
monazhou001(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:45:40
monazhou001: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-24 13:03:48
感谢参与，应助指数 +1
monazhou001(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-03-15 10:45:40
monazhou001: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-24 13:03:48
|
..... 1. 内参的变动理应该变动不大，正确的算法是Sample减去平均后的内参，会得到三个deltaCT，这个自然有自己的SD 2. 生物学重复的误差大就是实验设计问题，或者没有注意到细节，包括光照差异，处理时间等等。你可以剔除一个大离群值，做两个生物学重复也是可以的（我个人认为........） 3. 统计学不是这么用的，我个人认为，你要用ANOVA就必须上重复实验，而不是拿生物学重复之间做比较，这是概念混淆。 4. 我毫不客气地说：个人认为你这种做法纯粹是糊弄人，什么叫只做技术重复，技术重复能说明什么生物学问题？这只是看操作误差。你靠这种方式把SD Bar拉小，然后说明处理、样品间有差异，木有任何意义。 个人看法，如有说错请高手指点。 |
2楼2014-03-14 22:23:43
3楼2014-03-20 10:50:51
4楼2014-03-20 16:32:57
随风追梦
木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3385.4
- 散金: 220
- 红花: 1
- 帖子: 323
- 在线: 102.6小时
- 虫号: 1412733
- 注册: 2011-09-22
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
5楼2015-09-22 19:23:32
liubolin945
铁虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 643.3
- 散金: 140
- 红花: 3
- 帖子: 126
- 在线: 25.7小时
- 虫号: 3168575
- 注册: 2014-04-28
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
6楼2016-02-18 20:43:02
投票:
10