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xiangquanju

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[求助] 绝对定量PCR中标准品的疑问？已有4人参与

要做一个功能基因的绝对定量，样品有废水，土壤，大概40多个
现在要做标准曲线，打算用含有目的基因的质粒做模板，有个疑问请教一下大家，我是不是可以只从某一样品中扩增这个功能基因，转化质粒用来做标准品！因为考虑到不同物种之间基因序列也有微小的差别，这种差别是不是可以忽略
选择这个某一样品用来扩增这个功能基因的时候，有没有需要注意的地方！
做荧光定量PCR的新手，望大家多指教

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1楼 2014-04-04 10:35:55

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Jacob_24

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【答案】应助回帖

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xiangquanju(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-04-04 11:58:12

1.内参基因一般不会只选择一个多选择几个吧，如果做真核的一般我们选B-actin，GAPDH，GUS...等
原核的话，你自己看看文献，选择几个内参
2.提醒一下，你构建的质粒，最后要切成线性
3.你检测的是很多样品中的某一个特定微生物物种的特定的某个/些基因，理论上可以从某个样品中扩，但最好如果有纯种微生物样品的DNA岂不是更好，减少干扰。

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CCC

2楼2014-04-04 11:31:48

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Jacob_24

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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6812045你可以看看

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CCC

3楼2014-04-04 11:32:42

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xiangquanju

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-04-04 11:31:48
1.内参基因一般不会只选择一个多选择几个吧，如果做真核的一般我们选B-actin，GAPDH，GUS...等
原核的话，你自己看看文献，选择几个内参
2.提醒一下，你构建的质粒，最后要切成线性
3.你检测的是很多样品中的某 ...

谢谢你的回复
你说的选择内参是做相对定量的时候需要使用的吧
我是要通过对某一功能基因进行定量PCR，来分析相应的微生物群落差异
看了一些文献，都是用这个基因构建了一个质粒来制作绝对定量中的标准曲线

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4楼2014-04-08 09:45:03

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