24小时热门版块排行榜    

查看: 4580  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)

[求助] 绝对定量PCR中标准品的疑问? 已有4人参与

要做一个功能基因的绝对定量,样品有废水,土壤,大概40多个
现在要做标准曲线,打算用含有目的基因的质粒做模板,有个疑问请教一下大家,我是不是可以只从某一样品中扩增这个功能基因,转化质粒用来做标准品!因为考虑到不同物种之间基因序列也有微小的差别,这种差别是不是可以忽略
选择这个某一样品用来扩增这个功能基因的时候,有没有需要注意的地方!
做荧光定量PCR的新手,望大家多指教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glovegong

新虫 (初入文坛)

同学,我也遇到了同样的问题,要用绝对荧光定量检测猪和小鼠某个功能基因的表达量,不知到符合原理吗,毕竟引物不同。同学,你怎么解决的,求教。谢谢,一定要联系我,604867048,谢谢你

发自小木虫Android客户端
9楼2017-01-09 12:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

Jacob_24

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiangquanju(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励热心回帖交流 2014-04-04 11:58:12
1.内参基因一般不会只选择一个 多选择几个吧,如果做真核的一般我们选B-actin,GAPDH,GUS...等
原核的话,你自己看看文献,选择几个内参
2.提醒一下,你构建的质粒,最后要切成线性
3.你检测的是很多样品中的某一个特定微生物物种的特定的某个/些基因,理论上可以从某个样品中扩,但最好如果有纯种微生物样品的DNA岂不是更好,减少干扰。
CCC
2楼2014-04-04 11:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jacob_24

木虫 (正式写手)

CCC
3楼2014-04-04 11:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Jacob_24 at 2014-04-04 11:31:48
1.内参基因一般不会只选择一个 多选择几个吧,如果做真核的一般我们选B-actin,GAPDH,GUS...等
原核的话,你自己看看文献,选择几个内参
2.提醒一下,你构建的质粒,最后要切成线性
3.你检测的是很多样品中的某 ...

谢谢你的回复
你说的选择内参是做相对定量的时候需要使用的吧
我是要通过对某一功能基因进行定量PCR,来分析相应的微生物群落差异
看了一些文献,都是用这个基因构建了一个质粒来制作绝对定量中的标准曲线
4楼2014-04-08 09:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见