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hnsea

铜虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1837.8
散金: 7
帖子: 249
在线: 488小时
虫号: 2853503
注册: 2013-12-06
性别: MM
专业: 环境卫生

[求助] 细菌质粒提取及ＰＣＲ已有4人参与

如题，细菌用小提试剂盒提取质粒，浓度在几十至100ug/ml。
进行多个相关耐药基因（200-500bp）扩增并电泳检测，没有一个条带。marker(1000bp)也不亮，没完全分开。
是操作设计不好吗啊？
请分析下原因。
pcr条件如下:94度预热5-8min，94变性40S，Tm减5度退火40S,72度再延伸40s，重复30个循环，72度再延伸5min，4度保持。

琼脂糖电泳条件:1%的胶，120ev，120mA.

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当我哭泣我没有好看的鞋子时，却发现有人连脚都没有。

1楼 2014-07-27 22:04:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

愚者517

银虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hnsea: 金币+2, ★有帮助 2014-07-29 22:50:54

I give you a experiment plan: first: Agarose electrophoresis conditions: 0.8% glue, 120 V, 100mA.
second: PCR conditions : preheated 94 degrees 9 min, 94 modified 30S, annealing of 30S, extends 30s, repeated for 28 cycles, 72 degrees and then extends 5min, 4 degrees.