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hnsea铜虫 (小有名气)
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[求助]
细菌质粒提取及ＰＣＲ 已有4人参与
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如题，细菌用小提试剂盒提取质粒，浓度在几十至100ug/ml。 进行多个相关耐药基因（200-500bp）扩增并电泳检测，没有一个条带。marker(1000bp)也不亮，没完全分开。 是操作设计不好吗啊？ 请分析下原因。 pcr条件如下:94度预热5-8min，94变性40S，Tm减5度退火40S,72度再延伸40s，重复30个循环，72度再延伸5min，4度保持。 琼脂糖电泳条件:1%的胶，120ev，120mA. |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
hnsea: 金币+2, ★有帮助 2014-07-29 22:50:54
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hnsea: 金币+2, ★有帮助 2014-07-29 22:50:54
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I give you a experiment plan: first: Agarose electrophoresis conditions: 0.8% glue, 120 V, 100mA. second: PCR conditions : preheated 94 degrees 9 min, 94 modified 30S, annealing of 30S, extends 30s, repeated for 28 cycles, 72 degrees and then extends 5min, 4 degrees. |
6楼2014-07-29 14:24:20