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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

[求助] 求助,将质粒导入细胞再提出来,两个质粒跑胶的结果不一样? 已有2人参与

过程是这样的:
别人实验室惠赠的一个“炸弹”质粒,不知道抗性,不知道序列,但是含有我需要的基因和启动子,为了防止P不出来、连接等问题,将样品消耗。所以,我用A、C k抗性分别试质粒的抗性,结果A和K的板子长了菌,暂定质粒抗性为A+K。将获得菌株里面的质粒利用试剂盒提取出来跑胶验证。结果如下:

PNG1:
Lane1和2:转化后从菌体提出来的质粒跑胶结果
Lane3:别人实验室惠赠的质粒


所以想请各位虫友帮我分析下,我提取的质粒有问题吗,能用作模板来P我的基因吗?

对了还有个问题:就是惠赠的质粒稀释26倍后跑胶的结果和我提取质粒的跑胶如下:
PNG2:
Lane1:200bpmarker
Lane2:15000maker
Lane3:自己提取的质粒
Lane4:稀释26倍后的惠赠质粒

请虫友分析分析!!!!金币少不了!

求助,将质粒导入细胞再提出来,两个质粒跑胶的结果不一样?
1.png


求助,将质粒导入细胞再提出来,两个质粒跑胶的结果不一样?-1
2.png
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youlinglyw

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-11 16:49:20
应该没问题
不同方式提取出来的质粒,跑出来的胶还真有悬殊。
具体到那么大了,更是无法根据跑电泳判断。
你何不扩一下那个启动子啥的,然后测序一比就知道了
天行健
2楼2014-07-11 14:40:33
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-07-11 14:40:33
应该没问题
不同方式提取出来的质粒,跑出来的胶还真有悬殊。
具体到那么大了,更是无法根据跑电泳判断。
你何不扩一下那个启动子啥的,然后测序一比就知道了

下一步确实想这么做,为了防止浪费时间和药品,所以想问问虫友是什么情况。谢谢了!
3楼2014-07-11 14:47:58
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youlinglyw

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一匡天下

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【答案】应助回帖


一砖头飘死(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-11 20:17:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2014-07-11 14:47:58
下一步确实想这么做,为了防止浪费时间和药品,所以想问问虫友是什么情况。谢谢了!...

在没确定的序列证据前,我觉得没有谁敢百分之百确定这个是不是你要得质粒。
你可以酶切试试,当然前提是你知道酶切类型
天行健
4楼2014-07-11 14:57:05
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-07-11 14:57:05
在没确定的序列证据前,我觉得没有谁敢百分之百确定这个是不是你要得质粒。
你可以酶切试试,当然前提是你知道酶切类型...

要不我试着用一些常用的酶切酶切切看,看看能不能切开了
5楼2014-07-11 15:06:40
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 16:04:30
酶切可以初步判定;
质粒测个序是最直接的验证是否含您的目的序列。测序几十元钱,就先测一下确认才放心。
6楼2014-07-12 06:23:55
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