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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，将质粒导入细胞再提出来，两个质粒跑胶的结果不一样？
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

[求助] 求助，将质粒导入细胞再提出来，两个质粒跑胶的结果不一样？ 已有2人参与

过程是这样的：
别人实验室惠赠的一个“炸弹”质粒，不知道抗性，不知道序列，但是含有我需要的基因和启动子，为了防止P不出来、连接等问题，将样品消耗。所以，我用A、C k抗性分别试质粒的抗性，结果A和K的板子长了菌，暂定质粒抗性为A+K。将获得菌株里面的质粒利用试剂盒提取出来跑胶验证。结果如下：

PNG1：
Lane1和2:转化后从菌体提出来的质粒跑胶结果
Lane3:别人实验室惠赠的质粒


所以想请各位虫友帮我分析下，我提取的质粒有问题吗，能用作模板来P我的基因吗？

对了还有个问题：就是惠赠的质粒稀释26倍后跑胶的结果和我提取质粒的跑胶如下：
PNG2：
Lane1:200bpmarker
Lane2:15000maker
Lane3:自己提取的质粒
Lane4:稀释26倍后的惠赠质粒

请虫友分析分析！！！！金币少不了！

求助，将质粒导入细胞再提出来，两个质粒跑胶的结果不一样？
1.png


求助，将质粒导入细胞再提出来，两个质粒跑胶的结果不一样？-1
2.png
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1楼 2014-07-11 14:35:20
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-11 16:49:20
应该没问题
不同方式提取出来的质粒，跑出来的胶还真有悬殊。
具体到那么大了，更是无法根据跑电泳判断。
你何不扩一下那个启动子啥的，然后测序一比就知道了
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天行健
2楼2014-07-11 14:40:33
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-07-11 14:40:33
应该没问题
不同方式提取出来的质粒，跑出来的胶还真有悬殊。
具体到那么大了，更是无法根据跑电泳判断。
你何不扩一下那个启动子啥的，然后测序一比就知道了

下一步确实想这么做，为了防止浪费时间和药品，所以想问问虫友是什么情况。谢谢了！
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-11 14:47:58
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★
一砖头飘死(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-11 20:17:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2014-07-11 14:47:58
下一步确实想这么做，为了防止浪费时间和药品，所以想问问虫友是什么情况。谢谢了！...

在没确定的序列证据前，我觉得没有谁敢百分之百确定这个是不是你要得质粒。
你可以酶切试试，当然前提是你知道酶切类型
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天行健
4楼2014-07-11 14:57:05
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-07-11 14:57:05
在没确定的序列证据前，我觉得没有谁敢百分之百确定这个是不是你要得质粒。
你可以酶切试试，当然前提是你知道酶切类型...

要不我试着用一些常用的酶切酶切切看，看看能不能切开了
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5楼2014-07-11 15:06:40
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 16:04:30
酶切可以初步判定；
质粒测个序是最直接的验证是否含您的目的序列。测序几十元钱，就先测一下确认才放心。
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6楼2014-07-12 06:23:55
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