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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取竟然两条主带？？？！！！
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带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取竟然两条主带？？？！！！ 已有3人参与

求大虾鉴定，DL5000Marker，1和2为所提质粒（试剂盒小提），下面的一条带为目的带，但上面的大带是什么啊，求解答！

质粒提取竟然两条主带？？？！！！
110.jpg
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怎知一死生为虚诞？
1楼 2014-05-06 14:05:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

瓶儿水青

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:23:19
质粒有三种形态，由下到上依次为超螺旋，线性，开环，抽提质粒时一般会看到包括超螺旋构型的两种或三种

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13楼2014-05-08 00:32:46
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:23:28
质粒电泳会出现这种情况的。我怀疑你双切切开了，有可能带比较弱，建议你重新做下单切和双切验证下，另外我想说胶图照的相当不错哦

[ 发自小木虫客户端 ]
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16楼2014-05-08 00:44:38
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863828916

金虫 (正式写手)
质粒不同构型吧，有的有多条带，构型不一样
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2楼2014-05-06 14:12:03
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飘零星lin

金虫 (小有名气)
做个单酶切，再跑电泳看看，单酶切后应该只有一条带。
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3楼2014-05-06 14:27:23
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普通回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 863828916 at 2014-05-06 14:12:03
质粒不同构型吧，有的有多条带，构型不一样

其他构型的条带应该没这么亮吧？
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怎知一死生为虚诞？
4楼2014-05-06 17:54:32
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘零星lin at 2014-05-06 14:27:23
做个单酶切，再跑电泳看看，单酶切后应该只有一条带。

嗯，如图，DL1000，2为质粒，1为质粒双酶切，虽然没切开，但能否当单酶切图看？
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怎知一死生为虚诞？
5楼2014-05-06 18:10:31
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-05-06 18:10:31
嗯，如图，DL1000，2为质粒，1为质粒双酶切，虽然没切开，但能否当单酶切图看？...

如图
质粒提取竟然两条主带？？？！！！-1
20140506 Ptrc+双酶切验证模板2.jpg
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怎知一死生为虚诞？
6楼2014-05-06 18:12:31
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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带走云彩: 金币+1, ★有帮助 2014-05-07 09:58:17
哦，这个和刚才的那个是一个问题啊。

再补充一点，双酶切切出的片段多大？如果你切出的片段很小，那么相对这个长片段来说，它的DNA量是很小的，也可能在你的曝光条件下看不到。

另外，marker的选择也要注意一下，你选择这个marker，跟没用marker一样啊，有什么说明意义呢？
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7楼2014-05-07 03:45:31
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-07 03:45:31
哦，这个和刚才的那个是一个问题啊。

再补充一点，双酶切切出的片段多大？如果你切出的片段很小，那么相对这个长片段来说，它的DNA量是很小的，也可能在你的曝光条件下看不到。

另外，marker的选择也要注意一 ...

不是，这个M是为了验证我的PCR产物的，也就是1的左边，顺带我跑了酶切的产物，嘿嘿
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怎知一死生为虚诞？
8楼2014-05-07 09:52:00
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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带走云彩: 金币+1 2014-05-07 23:08:48
质粒本来就该两条带，螺旋结构，超螺旋结构。有三条带甚至更多就是有质粒断裂。
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9楼2014-05-07 17:22:54
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangweida2 at 2014-05-07 17:22:54
质粒本来就该两条带，螺旋结构，超螺旋结构。有三条带甚至更多就是有质粒断裂。

这带分的也太明显了吧，而且两条带浓度竟然相似？？
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怎知一死生为虚诞？
10楼2014-05-07 23:09:44
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