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带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取竟然两条主带???!!! 已有3人参与

求大虾鉴定,DL5000Marker,1和2为所提质粒(试剂盒小提),下面的一条带为目的带,但上面的大带是什么啊,求解答!

质粒提取竟然两条主带???!!!
110.jpg
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怎知一死生为虚诞?
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:23:19
质粒有三种形态,由下到上依次为超螺旋,线性,开环,抽提质粒时一般会看到包括超螺旋构型的两种或三种

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2014-05-08 00:32:46
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:23:28
质粒电泳会出现这种情况的。我怀疑你双切切开了,有可能带比较弱,建议你重新做下单切和双切验证下,另外我想说胶图照的相当不错哦

[ 发自小木虫客户端 ]
16楼2014-05-08 00:44:38
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863828916

金虫 (正式写手)


质粒不同构型吧,有的有多条带,构型不一样
2楼2014-05-06 14:12:03
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飘零星lin

金虫 (小有名气)

做个单酶切,再跑电泳看看,单酶切后应该只有一条带。
3楼2014-05-06 14:27:23
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普通回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 863828916 at 2014-05-06 14:12:03
质粒不同构型吧,有的有多条带,构型不一样

其他构型的条带应该没这么亮吧?
怎知一死生为虚诞?
4楼2014-05-06 17:54:32
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 飘零星lin at 2014-05-06 14:27:23
做个单酶切,再跑电泳看看,单酶切后应该只有一条带。

嗯,如图,DL1000,2为质粒,1为质粒双酶切,虽然没切开,但能否当单酶切图看?
怎知一死生为虚诞?
5楼2014-05-06 18:10:31
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-05-06 18:10:31
嗯,如图,DL1000,2为质粒,1为质粒双酶切,虽然没切开,但能否当单酶切图看?...

如图
质粒提取竟然两条主带???!!!-1
20140506 Ptrc+双酶切验证模板2.jpg

怎知一死生为虚诞?
6楼2014-05-06 18:12:31
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
带走云彩: 金币+1, 有帮助 2014-05-07 09:58:17
哦,这个和刚才的那个是一个问题啊。

再补充一点,双酶切切出的片段多大?如果你切出的片段很小,那么相对这个长片段来说,它的DNA量是很小的,也可能在你的曝光条件下看不到。

另外,marker的选择也要注意一下,你选择这个marker,跟没用marker一样啊,有什么说明意义呢?
7楼2014-05-07 03:45:31
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-07 03:45:31
哦,这个和刚才的那个是一个问题啊。

再补充一点,双酶切切出的片段多大?如果你切出的片段很小,那么相对这个长片段来说,它的DNA量是很小的,也可能在你的曝光条件下看不到。

另外,marker的选择也要注意一 ...

不是,这个M是为了验证我的PCR产物的,也就是1的左边,顺带我跑了酶切的产物,嘿嘿
怎知一死生为虚诞?
8楼2014-05-07 09:52:00
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
带走云彩: 金币+1 2014-05-07 23:08:48
质粒本来就该两条带,螺旋结构,超螺旋结构。有三条带甚至更多就是有质粒断裂。
9楼2014-05-07 17:22:54
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带走云彩

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by wangweida2 at 2014-05-07 17:22:54
质粒本来就该两条带,螺旋结构,超螺旋结构。有三条带甚至更多就是有质粒断裂。

这带分的也太明显了吧,而且两条带浓度竟然相似??
怎知一死生为虚诞?
10楼2014-05-07 23:09:44
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