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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] phenol chloroform提取质粒的电泳图是不是不管成功与否，都会出现必定出现的4条带 已有1人参与

phenol chloroform提取质粒的电泳图是不是不管成功与否，都会出现必定出现的4条带。我重组成功的质粒在6kb左右，但是从观察看来没有重组成功。另外我用的限制酶是EcoRI与PstI，重组到pETDuet-1上，再化学转入JM110或者电转DH5a，老是不成功。
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1楼 2014-01-05 17:52:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:45:06
ruchang2013: 金币+5, ★★★很有帮助, 很满意，谢谢 2014-01-16 15:13:28
4条带分别在什么位置？不会是指gDNA和RNA吧。克隆不成功的问题一般是酶切不好，完全按照DNA用量和酶的效价建立酶切体系，应该成功率很高的。
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2楼2014-01-05 17:58:33
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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-05 17:58:33
4条带分别在什么位置？不会是指gDNA和RNA吧。克隆不成功的问题一般是酶切不好，完全按照DNA用量和酶的效价建立酶切体系，应该成功率很高的。

这4条带是菌株本身的DNA或RNA？我这样认为对不？我的实验重组质粒如果转入成功，应该在pETDuet-1（5420）上面，重组成功的质粒大约在6400 bp
phenol chloroform提取质粒的电泳图是不是不管成功与否，都会出现必定出现的4条带
2014.01.05.png
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3楼2014-01-06 16:10:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ruchang2013 at 2014-01-06 16:10:37
这4条带是菌株本身的DNA或RNA？我这样认为对不？我的实验重组质粒如果转入成功，应该在pETDuet-1（5420）上面，重组成功的质粒大约在6400 bp

2014.01.05.png
...

是的。从你的电泳图上看，除了4条亮带以外，还有些其他的暗带。你可以调整曝光时间或者增加上样量，最好消化RNA后再跑电泳。
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4楼2014-01-07 00:53:16
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ruchang2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 00:53:16
是的。从你的电泳图上看，除了4条亮带以外，还有些其他的暗带。你可以调整曝光时间或者增加上样量，最好消化RNA后再跑电泳。...

谢谢啦
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5楼2014-01-07 10:25:27
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