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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » M13蓝白斑筛选出现了蓝斑和白斑？
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一路向北14

金虫 (小有名气)

[求助] M13蓝白斑筛选出现了蓝斑和白斑？ 已有4人参与

我在用JM109大肠杆菌作宿主，将M13mp18 RF I DNA通过化学转化的方法转入JM109中，于含有IPTG和X-gal的LB培养基上过夜培养，长出来了片状的蓝斑和点点状的白斑，想问一下虫友们，有没有做过类似的实验，帮忙分析和指导一下，谢谢！

M13蓝白斑筛选出现了蓝斑和白斑？
IMG_20140707_075850.jpg
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1楼 2014-07-07 10:37:30
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奔跑随风

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
一路向北14(dllchina代发): 金币+1, 鼓励应助 2014-07-08 22:01:08
你的应该是涂板没晾干，晾干之后就会是单个的单菌落，蓝色和白色的看的很清楚。
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2楼2014-07-07 10:44:10
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499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+3, 鼓励新虫应助 2014-07-08 22:01:24
一路向北14: 金币+4 2014-07-12 09:23:02
看平板图片好像整个板都有菌存在，不知是否是图片问题，或者 可能存在污染或抗生素失效，涂板没涂均匀可能出现小块蓝斑，连接效率高，DNA多的话 是有可能基本不存在蓝斑，建议你可以把平板放冰箱4℃放个一天，假阳性的白斑往往会变为蓝斑，还有 个人人认为i可以重做一次 涂板 的菌液可适当减少，然后 最好涂匀，做个对照 看看效果
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3楼2014-07-07 10:58:25
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
IPTG和X-gal没有涂匀，菌在少涂点，涂板水平要改善
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ControlMyself
4楼2014-07-07 15:24:27
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一路向北14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 499649610 at 2014-07-07 10:58:25
看平板图片好像整个板都有菌存在，不知是否是图片问题，或者 可能存在污染或抗生素失效，涂板没涂均匀可能出现小块蓝斑，连接效率高，DNA多的话 是有可能基本不存在蓝斑，建议你可以把平板放冰箱4℃放个一天，假阳性 ...

我要的是蓝斑。之前转化了两次，没有长出白斑，不知道这次怎么长出白斑了，还有蓝斑怎么成片的生长，而不是单菌落呢？
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5楼2014-07-07 17:08:58
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一路向北14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2014-07-07 15:24:27
IPTG和X-gal没有涂匀，菌在少涂点，涂板水平要改善

可能涂板水平真的不好，但是菌涂少点的话，会不会长不出来？
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6楼2014-07-07 17:11:07
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499649610

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 一路向北14 at 2014-07-07 17:08:58
我要的是蓝斑。之前转化了两次，没有长出白斑，不知道这次怎么长出白斑了，还有蓝斑怎么成片的生长，而不是单菌落呢？...

成片的涨 最通常的解释 就是涂板没涂好，或者说有抗生素失效导致，蓝斑的话不是说明是空载体么？怎么要蓝斑？
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7楼2014-07-08 08:58:54
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一路向北14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 499649610 at 2014-07-08 08:58:54
成片的涨 最通常的解释 就是涂板没涂好，或者说有抗生素失效导致，蓝斑的话不是说明是空载体么？怎么要蓝斑？...

我是将M13mp18 RF DNA转入到JM109大肠中的，所以我需要的是蓝斑，但是白斑我不知道是什么东西？就是蓝斑也好奇怪？
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8楼2014-07-08 09:48:07
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leonaliu2013

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉是抗生素失效，不然不会出现这么高的转化效率。一般连接产物涂板，肯定会有单菌落。另外把板吹干一点再涂。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-07-08 10:26:03
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一路向北14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by leonaliu2013 at 2014-07-08 10:26:03
感觉是抗生素失效，不然不会出现这么高的转化效率。一般连接产物涂板，肯定会有单菌落。另外把板吹干一点再涂。

我没有加抗生素
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10楼2014-07-08 10:53:34
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